HBV：中东基因组结构、HBVSAg分离和创新的病毒治疗

埃萨姆·贾纳希¹Aboul-Ata E Aboul-Ata^{2 *}，我是El Kalamawy^3.,凯萨琳Hefferon⁴还有阿马尔·马哈茂德⁵

¹巴林大学理学院生物系，邮政信箱32038，巴林王国，埃及

²埃及输血公司基因工程研究部，埃及吉萨Dokki VACSERA

^3.美国纽约州伊萨卡市康奈尔大学分子生物学系

⁴埃及，穆尼奥尼亚，萨达特市，萨达特大学基因工程研究所

⁵分子生物学实验室二，植物病毒和植原体研究，植物路径。埃及吉萨ARC研究所，POB 12619

*通讯地址：Dr. Aboul-Ata E Aboul-Ata，基因工程研究部门，埃及血液公司，埃及输血，VACSERA, Dokki，埃及，吉萨，电子邮件:aboulata_nady@hotmail.com;aeaboulata@gmail.com

日期：提交：2017年7月8日；批准:2017年8月8日；发表:2017年8月09

如何引用这篇文章：JANAHI EM，Aboul ATA AE，EL Kalaavy IM，Hefferon K，Mahmoud A. HBV：基因组结构，HBVSAG隔离和创新的病毒疗法在中东启动。植物病原学。2017; 1: 059-061.
内政部：10.29328 / journal.jpsp.1001007

版权：©2017 Janahi EM等人。这是一篇根据知识共享署名许可证发行的金博宝app体育开放获取文章，允许在任何媒体中不受限制地使用、发行和复制，前提是正确引用了原始作品。

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)是世界上主要的传染病之一，慢性乙型肝炎病毒携带者有3.5亿。极少数人会发展成肝硬化或肝细胞癌，每年有超过100万人死于乙肝病毒引起的肝脏疾病。巴林巴林大学科学系的Janahi E.提交了以下关于乙肝病毒基因组组织的信息[2]，作为他在英国帝国理工学院博士学位(2007年)的一部分。HBV基因组组织有4个开放阅读框架(Open Reading Frames, ORF)，即Pre-S/S Gene、Pre-C/C ORF、P ORF和X ORF。监管元素有4个发起人(前S2,前S1, C推动者和X发起人),Pregenomic RNA,增强剂(1和掺掺2)参与cccDNA的形成,Glococorticoid-Responsive元素位于X ORF和P ORF重叠,聚腺苷酸化信号(直接重复1(根据DR1)和直接重复2 (DR2)),Epsilon-Stem Loop和转录后调控元件。HBV基因型D在我们中东地区流行。HBV基因组是一个部分松弛的环状dsDNA分子，由一个带有唯一缺口的全长链(负链)和一个可变长度的互补链(正链)组成。HBV被认为是一种逆转录病毒，因为它的复制涉及到前基因组RNA (pgRNA)的中间RNA功能的逆转录。HBV基因组的复制始于pgRNA的封装，并将HBV聚合酶编码成一个由病毒核心抗原形成的不成熟核衣壳。 Inside the immature nucleocapsid, the viral polymerase converts pgRNA into minus-strand DNA, which in turn is used as a template for the synthesis of the plus-strand DNA, resulting in the formation of the characteristic mature double-stranded, relaxed circular DNA molecule [2]. HBVsAg has been isolated from Egyptian samples and identified using RTPCR [3-5]. Polymerase and HBVsAg regions have been also isolated and identified [5]. HBVsAg (S) gene has been identified at the band size 25.42 kDa [3,4]. Virotherapy for plant-based vaccine structure has been speculated for future work. Proposed CMV-HBVsAg chimeric-virus construct. Cucumber mosaic virus (CMV) 26 kDa hybrid coat protein (CP D/S) gene for 2 strains (CMV/S and CMV/D) were isolated and amplified from sgRNA 4 using F and R primers. Replicase gene (RP) and 30 kDa movement protein gene (MP) were used. Promoter (35sP). Nopaline synthase terminator (Nos3T) are constructed between Right and left boarder (RB and LB). Proposed BeYDV-HBVsAg chimeric virus construct. HBVsAg (S) protein -Bean Yellow Dwarf Begomovirus chimeric virus [6]. Long and short intergenic regions (LIR & SIR) of bean yellow dwarf Gemini virus as well as capsid protein (CP), movement protein (MP) and replication-associated protein (RepA) genes and as well as 35s P and Nos3T will be constructed between Right and left boarder (RB and LB). Brief processing of vaccine production is as follow: a. Virus and RNA sources, which is HBVsAg that has isolated as two isolates from Egypt by El-Kalamawy et al. [4]. Also Mahmoud and Hashem [5], have isolated HBVsAg and HBVpAg. Also, Elghannam et al. [3], have isolated HBVsSg. b. Computer-Assisted Analysis, c. in vitro Construction of Chimeric Viruses (1. Construct Design, 2. Target Gene (Sub-units), Gene Promotors, Terminators and Orientation, 3. Virus-Based Vector (Recombinant Viral Genes), 4. CP, Replicase and Movement Protein Genes, 5. Chimeric Virus Stability. 6. Plant Bioreactor Inoculation, Vacuum and Agrobacterium infiltration, 7. Transient Expression, 8. Gene Transformation, 9. Plant-expressed Protein Vaccine Confirmation (Symptomatology, EM and WB). Scaling up vaccine-containing plants, Expressed-protein vaccine purification and dosing. Bioreactor host plant has to be chosen.

提出Chimeric-Virus构造

图1:提出了BeYDV-HBVsAg嵌合病毒构建。将之前分离的25.42 kDa的HBVsAg (S)蛋白(3)与Bean Yellow Dwarf begomvirus构建嵌合病毒。将对豆黄矮gemini病毒的长、短基因间区(LIR和SIR)以及衣壳蛋白(CP)、运动蛋白(MP)、复制相关蛋白(RepA)基因和HBVsAg (S)靶基因以及35s P和Nos3T进行实验。CaMV 35s启动子(35sP)。诺帕林合成酶终止子(Nopaline synthase terminator, Nos3T)位于左右边界(RB和LB)之间。箭头方向为内含子(Int.)的C1、C2和V1、V2的定向活动。该构建物将插入pBY002双载体H5α e.c oli细胞中，转染到合适的生物反应器[1]。Kathleeh Hefferon使用双子豆黄矮病毒作为载体获得植物性HBV疫苗转染番茄和烟草[5]。

图2:25.42 kDa HBVsAg（S）（5）已从埃及患者样本中分离并鉴定为靶基因[3]。CMV HBVsAg（S）嵌合病毒结构被假定用于保护起始。将黄瓜花叶病毒（CMV）26-kDa杂交外壳蛋白（CP-D/S）基因从2个品系（CMV/S和CMV/D）中分离并用特异性引物从sgRNA-4中扩增。复制酶基因（RP）和30kDa运动蛋白基因（MP）将用于靶基因复制。CaMV 35s启动子（35sP）和NoSaline合成酶终止子（Nos3T）也构建在左右边界（RB和LB）之间。它将被插入到一个二进制向量中。该构建体将被转染到生物反应器宿主中[6]。

aboula - ata等人利用黄瓜花叶病毒(CMV)重组CP转染HCV R9嵌合病毒到番茄以及烟草、生菜、胡萝卜、黄瓜和香蕉中，其中包括[1]。Huang等人在使用HBVcAg时获得了0.8 mg/g的表达蛋白。Pniewski等[8,9]使用HBVsAg和l -HBVsAg以及M-HBVsAg得到了少量的蛋白µg/g。

表达重组植物蛋白疫苗是发展中国家控制人类和动物病毒（HSV-2、HCV、HBV等）的一种新趋势。它包括大规模植物生产、自动植物转化、具有足够数量的嵌合病毒（具有双倍数量的目标基因）和生物反应的宿主植物物种。上述所有因素在第三世界国家很容易找到。它们还可以与发达国家合作。在这些国家，STD-HBV可能是使用HBVsAg进行疫苗接种的良好工具。科学家[7-9]对HBV靶基因（HBVsAg、L-和M-HBVsAg、HBVcAg）的少量表达蛋白的发现，使我们推测了另一种植物病毒载体系统构建的嵌合病毒。