主要使用的替代光源(ALS)在血迹的评价主要集中在检测全血,较少关注可视化的血清。血清可能会分开在凝血池,因为它相对无形的特定背景,未被发现的罪犯试图清理犯罪现场。365年365最近,紫外线(UV)是血液评估证明是一个有效的工具,用于检测甚至微量血清。这里的环境条件对血清的影响染色外观进行评估,包括温度、pH值、蛋白酶敏感,溶解度和老化。有趣的是,人们发现血清的紫外荧光增加接触热,可见光下伴随着颜色的变化,在多个溶剂溶解度下降。可视化效率的血清污渍有些变量,根据材料类型它是干的。最后,当前的研究文件加热形成的荧光的影响血清晕环干涸的血迹。综上所述,这些数据表明,血清检测可能会影响到某些条件下影响其可视化的可见光和紫外线。

全血相比,相对较少的检测方法存在血清使用肌萎缩性侧索硬化症。在受害人移动的情况下,血清可以摆脱在凝血过程中,由于血清相对听不清在许多材料在可见光下,注意到身边有一罪犯试图掩盖罪行。365最近的研究表明,紫外线(UV 365)提供了一个简单,有效,无损ALS方法检测血清中多种表面[1]。

先前的结果变量如温度和pH值对血液的影响外观和评价主要是局限于那些涉及干全血、血清液体,或分离血清蛋白,如白蛋白[2 - 6]。的确,相对较少的信息存在对环境条件的影响干血清的特点,以及这些因素如何影响其检测。为此,进行的一系列研究来评估血清的出现在各种情况下污渍。这些数据表明,血清属性可以影响某些治疗,包括那些影响血清外表下365紫外和可见光。这些发现在血液检测和分析的影响进行了讨论。

全血和血清

人类血液从健康志愿者获得了手指粘方法使用健康切口设备(CVS药店^®美国)装有一个微型柳叶刀(CVS药店^®美国)。血下降到封口膜^®米实验室电影(比公司公司,奥什科什,WI)和转移到1.5µl埃普多夫^®微型离心机管(埃普多夫,汉堡,德国)使用10 - 100微升(µl)埃普多夫^®微吸量器(德国汉堡),音量设定在100µl;血然后根据需要添加到材料,使用相同的音量设置为5 - 10µl微吸量器。岁的样本存储在塑料托盘盖子长达两年。血清的净化血液被允许凝结了两个小时在1.5µl埃普多夫管,然后旋转在微型离心机(韩国京畿道Qualitron Inc .)为1分钟。上层清液取出,转移到一个新的管;这个循环重复2 x直到没有可见的红色物质。此外,人类血清获得创新研究(创新的研究公司,诺MI),购买汇集人类血清凝块。

紫外光源

两个紫外线系统被用于这些研究:LED紫外线手电筒,365海里,领导- uv301 - 356 nm(深圳市Lightfe光有限公司、深圳、中国),称为系统1;和两个领导便携式3瓦特紫外线灯泡,365 nm, UV - 3 - w - 365紫外- e27 ac(黄金产品,南艾尔蒙地,CA)定位在~ 45^o角的主题和装有NUV M55.0 x 0.75滤波器(埃德蒙兹光学、巴林顿新泽西),称为系统2。所有使用索尼RX100数码相机拍摄照片,和425 nm长通滤波器(埃德蒙兹光学、巴林顿新泽西)放置在相机镜头前与系统2。

面料和材料

具体的面料,被用于这项研究包括:绘画纸^®1毫米滤纸;商业用品从乔安妮的织物商店,购买指定类型1,3,5 - 7;亚麻是手织从自然,未处理的亚麻、指定为2型;天然未加工的亚麻(化学免费、原色、未染色的)由100%有机亚麻,指定为类型4;和白色的棉T恤穿旧商业洗涤剂,洗了好几年。所有面料都是来自作者的个人收藏。其他材料包括不锈钢菜刀,木地板,瓷砖,和一个黑色的皮钱包。

酸/碱治疗和加热

确保彻底浸泡和吸收,滤纸在多余的液体四个小时孵化方案pH值约为2 - 13,允许添加血清前彻底干燥。pH值的解决方案验证了通过添加10µl解决100µl通用指标。直接加入酸或碱血清,大约45µl血清混合5µl 0.1 M盐酸或5µl 0.01 M氢氧化钠。10µl混合物加入滤纸的评估紫外荧光和10µl不一100µl通用解决方案来验证指标博士取暖,样本在数字干浴加热孵化器与加热块(4 E的科学、广州、CN)的温度高达100^oC,台面Comfee烤箱(美的集团、美的、CN)温度高达300^oC,或自由放养烤箱(通用电气(General Electric),波士顿,MA)温度高达300^oC。

溶解度和蛋白酶治疗

溶剂治疗,10µl血液或血清的添加到滤纸和干了至少一个小时;样品被切成两半,放在一个1.5µl埃普多夫微型离心机管包含1.2µl溶剂与间歇摇晃3小时。样本与蒸馏水冲洗简要评估之前和允许干燥。以下使用溶剂:蒸馏水,白醋(克罗格,诺克斯维尔,TN), 5% SDS(σ,圣路易斯,密苏里州),5% Triton x - 100 (CCS, LLC, Quakertown PA), 5%渐变20(佛罗里达实验室公司、劳德代尔堡、FA), DMSO (Heiltropfen、伦敦、英国),70%异丙醇(克罗格,诺克斯维尔,TN), 91%异丙基(CVS药店,诺克斯维尔,TN) cholorform(σ,圣路易斯,密苏里州)和Folex清洁解决方案(统一的杂货商,斯托克顿,CA)。蛋白酶消化,被干到滤纸样品然后resuspended 1µl消化缓冲区(0.08磷酸钾,4毫米氯化钠,3毫米CaCl₂,0.5% SDS, pH值8.0)包含10µl蛋白酶K(重组、PCR品位)酶(热费希尔科学、沃尔瑟姆,MA)。样本孵化为1.5小时37摄氏度,然后转移到一个新的包含新鲜缓冲和酶管潜伏期。

如图1所示,全血出现相对黑暗的紫外线下,与血清,其可视化增强(图1)。在这个波长和全血吸收不发出荧光;血清的荧光全血分离是蒙面,除非发生[1]。

pH值的影响对血清污点外观评估通过增加血清滤纸,先前浸泡在解决方案pH值约为2,或通过添加酸或碱直接血清,然后转移到滤纸。作为证明,血清中无明显差异紫外荧光观察使用方法(图2 a, B)。接下来,温度对血清的影响染色出现被加热50个样本检测^oC - 250^oC十分钟。如图3所示,血清在控制类似的外观,50^oC, 100^oC组,发生这样的温度在- 150有明显的区别^oC或更高版本(图3)。在150^o血清C,有浅褐色/秋麒麟草的外表在可见光下,与一个光明,淡黄色的紫外荧光(图3)。增加温度导致红色在可见光和紫外荧光下降(图3)。虽然在滤纸是明显的颜色变化与加热(图3),比较结果血清出现时被玻璃幻灯片使用(图3 b),证明加热的影响独立于纤维素和可能发生任何可能存在微小的杂质在滤纸。同理,增加heat-dependent UVF干血清被认为与其他材料(图4),包括墙砖,皮革,木地板,厨房刀,木地板,和岩石(图4 a、B),尽管温度阈值变量。考试的两种类型的纸板显示明显的差异。血清添加到瓦楞纸板显示增强UVF加热(图4 b),与血清干一种薄的纸板,没有荧光在任何温度下测试,虽然也有类似的样品外观下可见光和紫外线加热后250年^oC(图4 b)。血清白色纯棉t恤上被UVF几乎察觉不到的,即使加热(图4 b),虽然外表下可见光类似于滤纸(图3)和其他面料(见下文)。与白色棉纺织品,高背景荧光可能是因为添加了荧光美白产品,在其生产。当血清添加到几种不同类型的亚麻布和检查,血清的紫外荧光结果变量随时可见的紫外线下一些床单在加热之前,而不是其他人的(图4)。血清的一般来说,紫外荧光增强加热后,尽管的血清可视化取决于个体结构(图4 c)。在这些结果扩展,类似的实验进行一组扩展的纺织品、应用加热前后全血和血清(图5)。Post-heating除了允许血清评价任何更改的上下文背景(纺织)过程中可能出现的外观。一个实验性的键如图5所示。

预热要求增加紫外荧光的血清血清添加到滤纸post-heating显示类似的外观作为对照组(图5)。有趣的是,荧光光环出席加热血液的边缘(图5),这是更详细地评估(见下文)。检查一个扩展面板纺织品显示,类似于我们之前的结果,可视化的血清UVF未经处理和加热亚麻布是变量,从勉强可见到明显发现(图5 b, C)。与某些材料(亚麻类型1、2、6、7),延长加热导致减少紫外荧光,而在别人(滤纸、亚麻类型3和5),检测能力是保持a - c(图5)。在所有情况下,没有明显增加血清UVF post-heating添加时,强调对血清的主要因素是温度影响结果。加热对血迹的影响时更详细地检查,指出,血清荧光晕环是明显只有十分钟的加热后150年^oC(图6,箭头),和更少的明显较高的加热(图6),也许是因为血清已开始颜色转移到更深的外观(图3 a, B)。

加热引起的血清晕环也血迹干其他材料,如玻璃、皮革(图6 b)。

有趣的是,当年龄血迹(~ 2岁)被加热没有明显的血清晕环(图6)。综上所述,这些结果表明,加热导致增加UVF干血清在许多材料,尽管可视化的程度依赖于背景荧光的物质血清干。此外,这些数据文档,加热干涸的血迹与荧光的出现晕环外围,这对年龄没有观察到血(见讨论)。

全血和血清的溶解度在多种溶剂是检查,显示类似的溶解度概要文件(图7 a, B)。是无效的异丙醇溶剂,DMSO,氯仿(图7 a, B)。相比之下,血迹和血清污渍很容易溶解在水中,甘油,醋,Triton-X 100年,SDS,渐变,和spot-removal解决方案(Folex)(图7 a, B)。加热后在150^oC十分钟,血液和血清是溶于溶剂的测试(图7 a, B)。先前的研究表明,某些果汁显示相似的紫外荧光从血液凝结的人类血清和血清晕环可以模仿他们的全血之外[1]。在当前报告,两酸橙和柠檬果汁是溶于异丙醇和DMSO(图7 c),提供一个有效的方法来区分他们从血清(图7 b)。进一步定义血迹的温度范围内和血清污渍成为水不溶性,实验进行了100年在限制范围内^oC - 150^oc .如图8所示,观察部分水溶性下降在130 oC,完全是在150年完成^o岁的C(图8)。血清(~ 2年)显示增加紫外荧光相对于刚干的血清,与新鲜血清干不同,不容易溶于水(图9)。

同样,血清污渍,简要熨显示增加紫外荧光相对于控制血清,和水不溶性(图9)。水不溶性也观察到两岁血迹和熨血液(图9)。在一起,这些结果表明,干血和血清由类似的溶剂溶解,加热时溶解度明显减少。此外,这些数据显示,年龄在血清显示增加UVF相对刚干,就像激烈的血清,水不溶性。也指出,某些解决方案显示类似UVF血清(果汁),可能与血清的区别在于使用溶剂DMSO溶液或异丙醇等。

最后,血清污渍和血迹的易感性蛋白酶消化了。作为证明,新鲜全血和血清干容易溶解在缓冲(图10),不像年龄样品所需酶的存在删除(图10)。激烈的血清污渍和激烈的血迹被蛋白酶(图10)有效地消化,和两人都完全耐高温(200^oC),(图10)。熨血清并没有完全被蛋白酶消化(图10),即使多次酶(见材料与方法)。血迹,已经熨在很大程度上消化了,虽然有些剩余血清出现持续(图10),由紫外线验证检查(数据未显示)。综上所述,这些结果表明,年龄在岁的血迹和血清污渍仍然容易被蛋白酶酶消化,与加热样品,相对耐药。

当前研究评估各种环境条件的影响在血清和污渍的外观检测使用UV 365。这些结果表明,紫外荧光检测血清增强在暴露在温度约150^oC,高温(200年有所下降^oC - 250^oC),伴随着红色可见光。在加热导致增强UVF血清绝大多数物质测试,效果有点变量与某些纺织品,这取决于特定物质的血清是干的。对一些人来说,如薄的纸板,白色的棉花,和某些类型的亚麻布,紫外检测血清控制样品非常困难,只有轻微改善血清污渍被加热之后,强调材料的荧光背景的影响血清的干。这种分析可能是有用的在犯罪现场包含新鲜和血液岁虽然物质的血液或血清干可能会影响检测的效率。在新鲜血液的存在,这种方法的实用性分析血清是由于其相对隐身在许多基质在可见光,血清可能注意到身边有一行凶者他们的清理工作关注的红色污渍去除区域;如前所述,血清可能会分开全血凝血过程中,特别是在情况下一个受害者可能是[1]。血清荧光随老化,提高其检测的可能性。报告中说明,这种方法相对敏感,甚至能够检测微量血清,小至5 - 10µl原来的体积。

之前的研究表明,液态全血开始分离成其组件在相对温和的温度;拉金和银行报道称,撞击血液到达金属表面时~ 50^oC +血清分离开始发生[5]。当前报告代表的第一个评价加热影响血清出现在干的血迹,特别是使用肌萎缩性侧索硬化症,UV 365,为其检测。这些结果表明,分离血液细胞和血清之间发生在与加热干血迹;也有可能一个薄的边缘可能存在血清的四周血迹在室温条件下,其存在披露在加热。薄荧光边界环中,并未观察到血迹加热温度升高时,符合减少紫外荧光观察血清污渍,尽管它也可能一些血清蒸发可能发生[5]。还指出在这些研究中,并未观察到荧光边界环的血迹岁大约两岁。人们已经发现,两个月大的血迹显示相似的结果,天血,即荧光边境加热后明显(未发表的观察),表明干血迹进展超出了这个时期的变化。未来的努力将指向进一步定义的特定阶段血清分离,随着时间的推移发生在各种条件下的血迹。

岁血清显示增加UVF相对最近都干的,这是与在水中溶解度下降有关。值得注意的是,不同的分析全血、血清检测可能增强的随着时间的推移,根据可能出现的环境条件。验证,血清实际上是目前需要确认测试,类似于治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的精液或唾液检测方法。据推测,变性的干血清中热处理或老化导致一个展览增加了紫外荧光聚合状态,尽管这个观察的精确的分子基础还有待确定。

类似于全血,这是发现,某些溶剂是无效的增溶的干血血清,其中70%异丙醇溶剂,容易清洗新鲜血液的许多相对不吸水的表面。尽管水似乎有效地破坏干血清和纤维素之间的分子间作用力,这种效应开始削减短期暴露于中期温度在室温下或老化(大约两年)。目前正在进行实验,进一步定义的时间内干血清转移到水不溶性和增强紫外荧光在衰老。岁年龄在血清和全血仍容易受到蛋白酶去除,而加热样品没有,这表明特定阶段的血液变性可能存在可以进一步定义为更详细的检查为全血和血清聚合的分子基础。

感谢塞缪尔Pellicori有趣的讨论(Pellicori光学咨询、圣芭芭拉分校CA)。

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