低灵敏度的careHPV™试验检测宫颈样本中致癌人类乳头瘤病毒感染艾滋病毒和免疫肯尼亚妇女

背景:人类乳头瘤病毒(HPV)感染引起宫颈癌(CC),一种常见的恶性肿瘤在肯尼亚妇女中。新的CC筛查方法依靠致癌HPV(“高风险”,或HR-HPV)检测,但大多数没有评估拭子从肯尼亚的女性。

方法:人乳头状瘤病毒类型进行155宫颈拭子从肯尼亚妇女使用罗氏线性阵列®(LA)和careHPV™(careHPV)化验。检测14致癌HPV类型在洛杉矶careHPV试验与结果。

结果:相对于洛杉矶,careHPV试验敏感性和特异性为53.0%和80.9%,分别。的敏感性和特异性careHPV拭子从宫颈发育不良的女性是74.1%和65.2%,分别。的敏感性和特异性careHPV拭子从感染艾滋病毒的妇女为55.9%和96.4%,分别。careHPV的总体协议分析与LA是实质性的。

结论:careHPV化验的结果是有前途的致癌HPV检测在肯尼亚的女性。careHPV的低灵敏度检测HR-HPV可能会限制它的利益作为筛查工具。因此,一个完整的临床验证研究是非常可取的careHPV试验前可以接受宫颈癌筛查。

宫颈癌(CC)是全球女性最常见的癌症之一[1]。人类乳头瘤病毒(HPV)的病原体是CC [2,3]。许多人乳头状瘤病毒类型的人乳头状瘤病毒类型16,18日,31日,33岁,35岁,39岁,45岁,51岁,52岁,56岁,今年58岁,59岁,68年被列为致癌,或者“高风险”(人力资源)类型由于流行病学研究显示出高度的致肿瘤性[4]。HPV 26, 53岁,66年被列为可能的人力资源类型。40 HPV 6, 11日,42、43、44岁,54岁,61年,70年,72年、81年和89年/ CP6108被认为是低风险(LR)类型CC发展[4]。

大多数妇女在肯尼亚和其他撒哈拉以南非洲国家不定期为CC[5]的筛选。对于那些筛选,视觉检查与醋酸(通过)几乎总是使用,但这个测试缺乏敏感性和特异性诊断子宫颈的癌前病变(6 - 8)。细胞学检测不是大多数女性在肯尼亚。有一个转向使用致癌HPV DNA检测作为CC的筛查工具在撒哈拉以南非洲和其他世界的一部分[9]。HPV检测化验可能适用于CC筛查项目的国家有限的资源如在撒哈拉以南非洲地区,根据成本和性能。这些化验可能包括GeneXpert, Sacace™HPV基因型14 Real-TM定量(定量),careHPV™(careHPV),和其他[10]。此外,即时HPV检测感兴趣的由于潜在的分权筛查CC。然而,低敏感性和特异性检测致癌HPV可能导致管理不善。因此,本研究旨在比较careHPV,测试可能可以用于CC预防项目在撒哈拉以南非洲地区与罗氏线性阵列(LA)分析,这是一个人乳头状瘤病毒测试广泛用于世界各地的流行病学研究,因此可以被认为是一个比较其它人乳头状瘤病毒测试。

研究网站

研究参与者招募和登记Moi教学和转诊医院(MTRH)裂谷省埃尔多雷特,肯尼亚。MTRH,肯尼亚西部最大的转诊医院,位于离镇。这医院有良好的基础设施为筛选、诊断和治疗的CC。样品进行了处理和实验室化验中心的全球健康研究、肯尼亚医学研究所以及基苏姆,肯尼亚。

伦理批准

伦理批准获得从肯尼亚医学研究所的科学和伦理审查单位(KEMRI-SERU)协议号码:KEMRI /塞鲁/ CGHR / 052/3322和制度研究和伦理审查委员会(IREC)协议号码:风扇:IREC 1730 Moi教学和转诊医院(MTRH)和莫伊大学医学院,肯尼亚。

研究人口、设计、样本收集和处理

消除识别信息干宫颈拭子标本,收集的妇科医生或一般医生/护士在盆腔检查Chandaria癌症Centre-MTRH和学术模型提供医疗诊所(AMPATH)储存在-80°C AMPATH参考实验室,直到足够数量的人乳头状瘤病毒检测。拭子标本在干冰运输以及实验室和储存在-80°C等待人乳头状瘤病毒测试。归档冷冻宫颈拭子从女性呈现在MTRH CC筛查(n = 283, 20-48岁)被用于HPV检测。宫颈拭子标本不是随机选择,但是选择基于可用性。宫颈拭子标本直接使用没有进一步处理careHPV™测试按照制造商的指示而从拭子中提取DNA测试。

DNA提取

拭子样本筛选了成1毫升1 x磷酸缓冲盐(PBS)和存储在-20°C等待DNA提取。DNA分离后的样品使用DNA提取试剂盒装备制造商的协议(试剂盒、希尔登,德国)。简单地说,DNA提取250年1 x PBSµL拭子标本,750年洗µL洗缓冲AW2 (DNA提取试剂盒提供的工具)和750µL绝对乙醇,最后筛选了120年µL缓冲大街(DNA提取试剂盒提供的工具)。纯化样本存储在-20°C到HPV检测/基因分型。

人乳头状瘤病毒检测和基因分型

罗氏线性阵列(LA)(美国新泽西州罗氏,Branchburg)检测37人乳头状瘤病毒类型包括20 HR-HPV基因型和17低风险(LR) HPV基因型[11]。简而言之,450碱基对碎片从HPV L1地区放大纯化DNA样本通过聚合酶链反应(PCR),其次是杂交使用反向行污点系统如前所述[12]。基因型鉴定在洛杉矶试验包括人乳头状瘤病毒类型6中,11日,16日,18日,26日,31日,33岁,35岁,39岁,40岁,42岁,45岁,51岁,52岁,53岁,54岁,55岁,56岁,58岁的59,61,62,64,66,67,68,69,70,71,72,73,81,82,83,84年,IS39和CP6108。

的careHPV™(careHPV)(试剂盒,盖瑟斯堡,医学博士,美国)是一个不区分特定的HPV基因型的检测,但检测的存在和缺乏一个或多个14 HR-HPV类型(31日16日,18日,33岁,35岁,39岁,45岁,51岁,52岁,56岁,58岁的59岁,66年和68年)。careHPV分析利用一个抗体顺磁珠技术定性检测一个或多个14高危人乳头状瘤病毒类型。根据careHPV HPV检测进行分析指导手册。

短暂,溶解产物提供缓冲区添加到标本,和人乳头状瘤病毒DNA变性的通过添加变性careHPV工具包提供的解决方案。杂交与完整的,具体的和互补的RNA形成HPV DNA / RNA复合物。磁性微丸坚定支持随后补充说,这是涂有anti-DNA-RNA混合抗体捕获dna rna混合动力车,允许分离和去除的特异性的材料。碱性phosphatase-linked anti-hybrid抗体被添加到绑定和检测捕获的HPV DNA / RNA混合的混合物。洗了删除的碱性磷酸酶共轭。产生的光强度的反应显色底物反映HPV DNA存在于样本的数量。的比例相对光单元(RLU)的意思是RLU最低积极控制(RLU / CO)是用于检测。被宣布为HPV DNA阳性样本如果阅读≥0.5 pg / mL被观察到。

统计分析

Buderer样本量计算公式是用于确定适当数量的样本研究[13]。公式是用来评估诊断测试通过评估测试筛选疾病的能力,使用等参数的敏感性,特异性和预测价值。统计分析是使用MedCalc执行软件版本15.6.1 (MedCalc软件、Mariakerke比利时)。数据来自155个样本测试的两个分析用于评价病毒学careHPV测定的性能。14 HR-HPV类型(16、18日31日,33岁,35岁,39岁,45岁,51岁,52岁,56岁,58岁的59岁,66年和68年)由两个化验检测被认为是分析。洛杉矶化验是用作比较测试计算病毒学careHPV试验的敏感性和特异性。卡帕和McNemar检验法统计分析的一致性careHPV对LA HPV基因型的检测分析。Kappa值解释为贫穷/轻微的协议(0.00 - 0.20),公平的协议(0.21 - 0.40),温和的协议(0.41 - 0.60),(0.61 - 0.80)实质性协议,或几乎完美的协议(0.81 - 1.00)[14]。McNemar检验法检验p值< 0.05,表明重大不整合之间由两个化验结果。

研究人口的人口学特征

283名妇女的平均年龄从谁标本获得35年(20到48年)。DNA成功从281个样本使用DNA提取试剂盒提取设备;两个样品产生DNA不足当量化NanoDrop™2000(热费希尔科学、威明顿、德、美国)。的NanoDrop™2000检测极限是2到15000 ng /μL,因此样本DNA浓度小于2 ng /μL被排除在后续分析。这281个样本然后使用拉分析37特定的人乳头状瘤病毒类型。

careHPV试验许可使用宫颈拭子样本直接从283年存档中提取DNA样本,179年存档剩饭有足够的原油样品材料使用careHPV HPV检测试验。与careHPV 179个样本测试,155年有效的结果,和24例(13.4%)有无效的结果。

比较的人乳头状瘤病毒DNA检测化验

如上所示,这些女性的宫颈拭子不是随机选择,但方便样本。分析155年拭子样本被拉,一个有效的测试careHPV结果。这些155拭子,105(67.7%)从正常的女性通过考试(CC)发展的风险较小和50(32.3%)来自女性异常通过考试(高危的开发CC)。关于艾滋病毒状况,93年155年的棉签(60.0%)来自女性免疫和62名(40.0%)妇女感染艾滋病毒。这些女性的平均年龄为155年的拭子是35年。

整体测试carehpv比线性阵列的性能

线性阵列允许特定类型检测37人乳头状瘤病毒类型。本研究的目的,线性阵列结果指定为积极只有14 HR-HPV类型还包括之一careHPV被检测到。测试的155个样本的洛杉矶,66 (42.6%)14 HR-HPV检测careHPV阳性。52(33.5%)的155份拭子样本化验为14 HR-HPV careHPV是积极的。

拉相比,结果careHPV测定14人力资源HPV类型检测(检测到这些类型的一个或多个):敏感性= 53.0%,特异性为80.9%,PPV = 67.3%,净现值= 69.9% (McNemar检验法测试,p= 0.061)(表1)。careHPV化验和洛杉矶之间的一致性是0.349。拭子样本105通过正常的女性,结果14 HR-HPV careHPV试验的检测类型:敏感性= 27.8%,特异性为86.4%,PPV = 62.5%,净现值= 59.4% (McNemar检验法测试,p= 0.015)(表1)。拭子样本50的女性通过异常,这些值是:敏感性= 74.1%,特异性为65.2%,PPV MnNemar测试= 71.4%,净现值= 68.2%,p= 1.000)。careHPV试验之间的一致性和洛杉矶妇女通过正常和异常的样本通过分别为0.269和0.394,分别为(表1)。

拭子样本93女性免疫,结果14 HR-HPV类型careHPV试验的检测:敏感性= 50.0%,特异性为73.8%,PPV = 50.0%,净现值= 73.8% (McNemar检验法测试,p= 1.000)。62妇女被感染艾滋病毒的样本,结果14小时HPV类型careHPV试验的检测:敏感性= 55.9%,特异性为96.4%,PPV = 95.0%,净现值= 64.3% (McNemar检验法测试,p= 0.001)(表2)。careHPV试验显示一致性值和洛杉矶在免疫和感染艾滋病毒的妇女分别为0.172和0.458(表2)。

与HR-HPV持续感染是宫颈癌癌前病变的危险因素发展,发展为CC在女性的一个子集。在撒哈拉以南非洲,CC筛查项目是有限的,诊断时往往在晚期治疗是无效的。因此,一直努力对人乳头状瘤病毒检测和发现工具,是可以接受的选项CC筛选[15]。careHPV试验证明好的病毒特异性敏感拉相比,但低于拉14 HR-HPVs整体的检测宫颈拭子样本。检测的低灵敏度的careHPV HR-HPV可能归因于HPV DNA的截点约5000册/毫升相比,300 - 3000拷贝/毫升(Sandri et al ., 2006)。careHPV的敏感性是53%检测HR-HPV在我们的研究中,这一数字相当于55%报告在布基纳法索(16、17)。尽管careHPV的整体低灵敏度分析在所有样本中,其病毒的敏感性是更好的(74.1%),异常的女性通过样本的结果。careHPV的一致性和洛杉矶是0.35总体拭子样本,这是相比略高0.25竖琴研究报道在布基纳法索和南非[17]。

careHPV测定的性能在VIA-abnormal女性宫颈拭子样本从肯尼亚西部证明这个试验可以用作点保健测试和初步筛查宫颈癌(CC)在低收入和中等收入国家(LMICs)或可能与醋酸结合目视检查(通过)。鉴于(careHPV和通过)化验都是相对便宜和简单的测试。大部分的CC筛查策略如细胞学的和HPV屏幕为发达国家和中低收入国家的要求,设计健康访问方面的差距普遍存在,资源稀缺。弥合这些差距,需要一种范式转移,和低成本筛查careHPV测试可能会提供一个潜在的解决方案,可能会导致宫颈癌早期干预,减少整体利率在转诊细胞学检查和跟进。

潜在的本研究的局限性包括小样本大小,在少数情况下,DNA材料不足分析所有拭子。此外,有限的样本大小不允许比较分析根据病变的不同阶段;(CIN) I, II, III和浸润性癌。最后,本研究样本用于存档的样本,因此不能代表使用的HPV检测在实际检测环境。

总之,careHPV化验的病毒学性能特征检测HR-HPV宫颈拭子从肯尼亚妇女通过结果表明,这种分析可能与异常为CC筛选提供一个选项。低灵敏度检测的careHPV HR-HPV可能会限制它的利益作为筛查工具,然而。还需要进一步的研究来测试这些化验在现实生活情况来确定他们在检测宫颈非典型增生HR-HPV和潜在的实用程序,并最终预防宫颈癌。

作者感谢我们所有的同事在肯尼亚医学研究Institute-University马萨诸塞州医疗(KEMRI-UMMS)他们的贡献在人乳头状瘤病毒测试和写作的援助,和内罗毕大学的(肯尼亚艾滋病疫苗项目临床研究所)(KAVI-ICR)允许我们执行careHPV实验室化验。

资助这项研究是由美国国家癌症研究所(美国),5 u54ca190151-02 (d .布朗,p . loehr o . Omenge)。提图斯m是一个接受者的U54指导奖学金。

的利益冲突

布朗博士从默克和接收研究经费有限公司,和已经收到赔偿咨询和讲座。其他作者声明没有利益冲突。

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