国际临床病毒学杂志》上

研究文章

抗病毒活性的桉树叶子camaldulensis ethanolic提取疱疹病毒感染

阿雅Abu-Jafar和艾哈迈迪Huleihel *

微生物学、免疫学和遗传学、健康科学学院,比尔,以色列内盖夫的本-古里安大学

*通信地址:马哈茂德•Huleihel微生物学、免疫学和遗传学、健康科学学院,本-古里安大学的内盖夫,比尔,以色列,电子邮件:mahmoudh@bgu.ac.il

日期:提交:2017年10月02;批准:2017年10月12日;发表:2017年10月13日

本文引用:Abu-Jafar, Huleihel m .抗病毒活性的桉树叶子camaldulensis ethanolic提取物对疱疹病毒感染。Int中国微生物学报。2017;1:001 - 009。DOI:10.29328 / journal.ijcv.1001001

版权许可:©2017年阿布的魔法师,等。这是一个开放获取的文章在知识共享归属许可下发布的金博宝app体育,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。

文摘

桉树camaldulensis (电子商务)被认为是传统的药用植物有价值的治疗效果。我们评估ethanolic离开的抗病毒活性提取物在不同的疱疹病毒。维洛细胞被感染的测试病毒(单纯疱疹病毒1和2(1型单纯疱疹病毒,HSV-2)和水痘一带状疱疹病毒(带状疱疹)]有或没有治疗电子商务提取和病毒感染发展被空斑实验评估。我们的结果显示重要的抗病毒活性研究提取对所有病毒进行测试。80%甲醇比例的提取提供了最高的活动对这些病毒有50%抑制浓度(IC50)为0.1±0.08,0.3±0.02和1对1型单纯疱疹病毒±0.03μg /毫升,分别HSV-2和带状疱疹和50%的细胞毒性(CC50)700μg /毫升。得到这个分数最高的抗病毒效应主要是添加和post期间感染时(p)或当它只增加了pi工作。同时,这个分数的数量明显减少感染性内源性病毒颗粒在细胞治疗80%甲醇分数只有病毒进入宿主细胞。协同抗病毒效应对所有测试病毒也观察到当细胞治疗的联合无环鸟苷(无环鸟苷)和80%甲醇的一部分电子商务。进一步的研究需要抗病毒活性成分的分离和鉴定/ s的分数。

介绍

病毒感染是全球主要的死亡原因之一,尽管抗病毒药物发展重大进展[1,3]。疱疹病毒DNA v属于家庭Herpesviridae和负责各种轻微到严重的人类疾病,这有时会危及生命尤其是immune-comprised病人和新生儿(4、5)。急性感染后,疱疹病毒建立延迟和坚持身体的不同细胞,根据感染病毒,一生。潜伏病毒再活化自然导致感染复发性感染患者[6]。虽然它能有效地处理核苷类似物,如无环鸟苷(无环鸟苷),但仍然寻找新的有效anti-herpetic药物的发展是很重要的无环鸟苷——抗疱疹病毒突变体特别是在免疫抑制和免疫缺陷综合症患者(7 - 15)。此外,无环鸟苷和其他可用的核苷类似物有不同的不受欢迎的副作用(如恶心、呕吐、头痛等)[16]和不高效再生疱疹病毒(17、18)。因此,有必要对小说有效anti-herpetic药物作用方式不同于核苷衍生品。

许多天然产物是已知的与他们的抗病毒活性,其中一部分已经用于治疗人类病毒感染与RNA和DNA病毒(18、22)。不同次生植物代谢物如类黄酮、皂苷、木酚素、单宁,alkoloids, polyines,噻吩,酚酸和不同糖被发现有明显的抗病毒活性对多种病毒(23日25)。尽管许多植物提取物抗病毒活动之前报道,他们的抗病毒作用机制仍然知之甚少。

桉树camaldulensis (电子商务)是一个澳大利亚本地树属的桉树和传播在世界的许多地方[26]。根据世界卫生组织和不同的先前的研究桉树叶和石油有药用治疗轻度呼吸道炎症,支气管炎,哮喘,发烧和喉咙的炎症(27、28)。此外,八个不同的组件被隔绝蓝桉树叶和发现抗eb病毒的抗病毒活性[29]。不同桉树精油的物种被发现具有各种生物活性如强抗菌活性对不同克(+)和克(-)细菌、抗真菌、抗病毒活动[26日,27日,30日,31日],antiinflamatory[28][32]和抗肿瘤细胞活动。桉树精油的主要生物活性成分erpenes和糖类(31、33)。

只有信息知之甚少桉叶提取物的抗病毒活性。发现原油methanolic提取的电子商务和大肠torelliana积极反对人类肠道病毒:I型脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒B和电子商务hovirus 6 [34]。的主要功能组件电子商务叶子ethanolic提取被发现包括单宁、皂苷、强心甾类黄酮[34]。此外,水提物的桉树水果有重大活动对1型单纯疱疹病毒而ethanolic提取显示小anti-HSV-1活动[35]。

在目前的研究中我们调查ethanolic提取物抗病毒活性的桉树叶子camaldulensis各种疱疹病毒家族成员(1型单纯疱疹病毒,HSV-2和带状疱疹)。

在体外。检查的结果显示有前途的抗病毒活性提取物对病毒进行测试。

材料和方法

材料。桉树camaldulensis (电子商务在以色列)叶子从树上得到增长。

无环鸟苷(无环鸟苷)从σ购买以色列。

的制备电子商务叶子ethanolic提取。Ethanolic从新鲜的叶子中提取制备电子商务。树叶被撞在95%乙醇溶液,用颤抖的48 h在4摄氏度的环境中,在2000转离心10分钟,上层清液收集到一个干净的瓶和颗粒都被丢弃。然后收集的上清液由蒸发干,溶解在95%乙醇给股票10毫克/毫升的浓度。包含2%的提取与培养基稀释新生牛血清(nbc)到适当的浓度。分馏ethanolic植物提取。ethanolic提取被反相色谱分离成不同的分数(RP-C18 Sepack)逐步甲醇梯度:0%,20%,40%,60%,80%和100%。细胞和病毒。非洲绿猴肾细胞(州立),从美国购买类型的文化集合(写明ATCC),罗克维尔市,医学博士,美国是生长在RPMI中10%的新生牛血清和抗生素(青霉素、链霉素和制霉菌素)和孵化在37摄氏度湿润空气含有5%股份有限公司2。1型单纯疱疹病毒获得写明ATCC (vr - 735),从病毒学实验室获得HSV-2和带状疱疹Soroka大学医学中心,比尔,以色列。2.5。细胞毒性检测。维洛细胞接受不同剂量的提取和提取物的毒性评价:(a)每天由光学倒置显微镜观察形态变化。(b) MTT试验进行了如前所述[36]。简单地说,适当的细胞培养与肝癌和50µg /毫升孵化解决方案在37°C 5 h。这个解决方案是由线粒体琥珀酸脱氢酶酶转化成不溶性甲瓒(紫色)。文化是用生理盐水洗净,SDS的解决方案是添加溶解甲瓒。吸光度测量在570 nm隔夜孵化后37°C,说明细胞的代谢活动。

病毒感染。这些细胞被镀在2×105细胞/ 24-well文化板块,RPMI nbc和抗生素的10%。隔夜孵化中移除后,这些细胞被感染1微升/细胞两个小时37°C。感染发展被空斑实验评估如前所述[37]。2 h后,未被吸收的病毒被感染和细胞覆盖一层0.6% carboxymethylcelleluse (CMC)。感染后两天(p)中央军委覆盖被删除,细胞层与10%的福尔马林固定的盐水,用结晶紫染色的,斑块数。

检查产品的抗病毒作用机制。受感染的细胞治疗增加产品的浓度在不同的时间之前,期间或之后感染:(1)只有在感染——包含部分的细胞层与介质孵化2 h。,然后中被适当的细胞被感染1莫伊病毒与分数没有进一步治疗;(2)只有在感染期间,然后细胞培养介质替换介质没有检查产品;(3)只有皮。- - - - - -cells were treated with the tested product immediately after 2h infection with the virus. The treatment was continued up to the end of the experiment; (4) during and p.i- cells were treated with the product at the time of infection and the treatment continued up to the end of the experiment.

测试产品的研究可能直接影响传染性病毒粒子,104空斑形成单位(空斑形成单位)的适当的病毒粒子与10µg /毫升pre-incubated测试产品在22°C的30分钟。然后这些混合物稀释104褶皱与新鲜的介质(抗病毒因子的浓度降到最低的时候感染)和单层细胞被感染了稀释混合物。

为了检查可能的测试产品对细胞内的影响- 1型单纯疱疹病毒复制,为2 h 1型单纯疱疹病毒没有细胞被感染治疗测试产品。然后,介质被删除,取而代之的是新鲜的介质有或没有测试提取和感染细胞被治疗从井中删除胰蛋白酶在20小时。p.i.”获得的细胞颗粒状,在1500转离心5分钟,用生理盐水清洗三次。每个小球resuspended 100µl生理盐水和细胞冻融打破的。细胞碎片在1500 rpm被离心5分钟然后包含内源性病毒的混合物用于感染细胞单层膜。

合作活动。测试之间的协同或添加剂活动电子商务分数和无环鸟苷(无环鸟苷)检查治疗的细胞以不同组合的一部分无环鸟苷当时,与病毒感染后。

结果与讨论

提取的细胞毒性。维洛细胞层和不同剂量的治疗电子商务叶乙醇提取物3天及其提取的细胞毒是评估通过日常形态观察和MTT测定如“材料和方法”一节所述。发现导致50%的毒性浓度(CC50)这个提取200µg /毫升(数据没有显示)。

抗病毒活性的电子商务提取对疱疹病毒。为了检查可能的抗病毒活性电子商务提取各种疱疹病毒的感染,维洛细胞层服用不同剂量的提取1 m.o.i. 1型单纯疱疹病毒感染的时候,HSV-2或带状疱疹。治疗是持续到实验的最后,抗病毒活性被空斑实验评估。所有测试的结果显示显著抑制病毒感染,可以看到图1所示。50%浓度的提取造成血小板抑制(IC50)的1型单纯疱疹病毒,HSV-2和带状疱疹感染1,3,0.1µg /毫升(图1)。这些结果分别与不同的协议之前的研究显示重要的抗病毒活性etanolic植物提取物对疱疹病毒感染(21岁,38岁的39)。然而,一些其他先前的研究,与我们的结果相比,有报道微分抗病毒活性的植物提取物在这些病毒(40-43),可能由于他们不同的生化和血清学特性(44岁,45岁)。

图1:抗病毒活性的电子商务叶ethanolic提取疱疹病毒。维洛细胞感染1 m.o.i。不同的疱疹病毒有或没有治疗各种浓度的电子商务提取。提取的细胞治疗的感染,感染(p)实验的最后。斑块数量(PFU)给出了积极的比例控制(感染但未经处理的细胞培养)。值意味着±SD (n = 3)。

选择性指数(SI)(确定CC50/集成电路50)电子商务提取对带状疱疹是最高的和最令人印象深刻的比较1型单纯疱疹病毒和HSV-2如图2中可以看到。同时,可以看出这个提取对带状疱疹的SI显著高于1型单纯疱疹病毒和HSV-2。尽管SI值的提取与检测病毒低于积极控制无环鸟苷(图2),它仍然值得继续研究他们对这些病毒的抗病毒药物可能因为隔离和净化抗病毒活性成分的提取,将最有可能改善其抗病毒的潜力。

图2:选择性指数(SI)电子商务叶乙醇提取物及其无环鸟苷(无环鸟苷对1型单纯疱疹病毒),HSV-2和带状疱疹。如果确定为CC50/集成电路50。值意味着±SD (n = 3)。

电子商务提取的分数抗病毒活性。电子商务提取分离成不同的分数与甲醇梯度作为“材料和方法”一节详细测试和抗病毒活性。我们对所有测试结果表明,抗病毒活性最高的病毒与80%甲醇分数而获得其他分数没有任何明显的活动(表1)。预计80%甲醇分数有显著较高的硅相比,粗提物和有趣的是高于SI无环鸟苷(表1)。这个结果是合理的,由于隔离和净化的抗病毒活性成分。这些结果与我们之前的发现显示,80%甲醇的f . binjamina和l . candidum叶乙醇提取物活性只有对1型单纯疱疹病毒及其HSV-2 60%甲醇分数高度活跃时对带状疱疹感染[21]。

表1:抗病毒活性的Ec甲醇分数和无环鸟苷对疱疹病毒。

Ec分数

CC50(µg /毫升)

1型单纯疱疹病毒

HSV-2

带状疱疹

集成电路50
(µg /毫升)

如果

集成电路50
(µg /毫升)

如果

集成电路50
(µg /毫升)

如果

Ethanolic提取

200±8

2±0。4

100

5±0.05

40

0。5±0.04

400年

0%的甲醇

500±65

不活跃的

- - - - - -

不活跃的

- - - - - -

不活跃的

- - - - - -

20%的甲醇

600±40

200±14。5

3

280±8.0

2。1

170±5.1

3.5

40%的甲醇

600±36

150±5.5

4

120±6.6

5

190±7.3

3.1

60%的甲醇

550±16

100±4.0

5。5

110±4.5

5

90±1.8

6.1

80%的甲醇

500±45

0.5±0.03

1000年

1.5±0.03

333年

0.4±0.01

1250年

100%的甲醇

400±32

250±13.1

1.6

150±13.7

2。6

185±3.9

2。1

无环鸟苷

70±4

0.1±0.005

700年

0.25±0.01

280年

0.15±0.007

466.7±25

Verocell层服用不同剂量的Ec纯化时分数和p CC50和集成电路50MTT比色值的分数和空斑实验详细刊登在“材料和方法”部分。值意味着±SD (n = 3)。

的影响电子商务80%甲醇分数在病毒感染的各个步骤。试图检查的步骤被病毒感染电子商务80%甲醇分数;细胞被感染了疱疹病毒1 m.o.i.测试和处理5µg /毫升的这个分数在不同的时间,或感染后在“材料和方法”一节详细。可以看到从结果呈现在图3中所有测试的最高和最有效的抑制病毒感染治疗产品时获得,感染后抑制(大约100%)。这些结果与先前的研究报道,抗病毒活性天然产物主要是防止病毒感染的早期步骤等直接影响病毒粒子,病毒吸附和/或渗透进入宿主细胞[5,14日,38岁,40岁,46)。当细胞治疗只在感染或私家侦探也有显著的抑制作用(超过50%)病毒感染发展然而,当治疗只有在感染前,只有一个小(大约15%)减少病毒感染(图3)。这个结果可能表明之间没有显著的交互检查产品和宿主细胞受体或可能这种交互是一个软弱和可逆的,因此,产品很容易清洗和从细胞中删除之前感染。这个结果也支持通过之前的研究没有发现任何重要的植物醇提取物和细胞受体之间的相互作用(22日,39岁,42)。此外,当病毒颗粒与检查pre-incubated提取部分没有明显的抑制病毒感染(图3),这意味着帽子没有直接提取测试分数之间的交互和病毒的测试。这些结果与之前的研究相比[21,42岁,47]显示强之间的直接交互ethanlic提取不同的植物和1型单纯疱疹病毒或HSV-2粒子,而我们之前的研究表明,没有显著的交互与带状疱疹的西番莲萃取[48]。

图3:治疗时间的影响电子商务80%甲醇比例对疱疹病毒的感染。维洛细胞感染了疱疹病毒1 m.o.i.和处理5µg /毫升电子商务80%甲醇分数不同的时间:仅为2 h感染之前,只在感染期间,只有pi或在和pi到实验的最后。此外,104空斑形成单位适当的病毒粒子pre-incubated 10µg /毫升电子商务80%甲醇分数为30分钟22°C。那么这些混合物稀释104单层褶皱新鲜培养基和细胞被感染了稀释混合物。空斑形成单位的处理提出了文化的积极的比例控制。值意味着±SD (n = 3)。

正如上面提到的,治疗感染细胞只有p i的重要部分抑制病毒感染引起不同检查病毒(图3)。这可能造成的干扰抑制内部渗透后的步骤在病毒复制周期可能病毒进入宿主细胞或再感染抑制的结果。为了研究这些可能性,细胞被感染的病毒和测试处理10µg /毫升的提取比例2 h后感染。私家侦探在20小时内病毒传染性是研究“材料和方法”一节中详细说明。我们的结果(图3)显示,所有治疗的细胞层电子商务分数显示超过50%抑制不同的测试病毒的感染发展(图3)。看来这个分数显著抑制引起的感染性病毒颗粒生产的生产在宿主细胞。良好,80%甲醇的各种植物叶子富含槲皮素等黄酮类化合物槲皮素3-rhamnoside和槲皮素7-rhamnoside已知抗病毒活动(21岁,49岁,50)。

合作的活动电子商务80%甲醇比例的商业anti-herpetic药物无环鸟苷。为了检查之间可能的合作活动无环鸟苷和电子商务80%甲醇分数,维洛细胞被感染和治疗的各种组合无环鸟苷和Fc分数组成的各种剂量的产品(集中在低浓度没有显著积极抗疱疹病毒的感染)。我们的结果显示一个重大合作抗病毒活性无环鸟苷和电子商务分数(图4)。当细胞治疗与0.1µg /毫升的分别电子商务分数或0.01µg /毫升无环鸟苷在感染和p。抗病毒活性较低(10 - 20%)。然而,当这些细胞被处理0.1µg /毫升的混合物电子商务分数和0.01µg /毫升无环鸟苷显著抑制(~ 75%)的病毒感染。这可能合作活动是一个协同活动之间的检查电子商务分数和无环鸟苷是非常重要的,可以有利于将来使用导致显著减少副作用和成本无环鸟苷。

图3:体育之间的协同活动80%甲醇分数和无环鸟苷。维洛细胞治疗分别为0.1µg /毫升的体育分数或0.01µg /毫升无环鸟苷在不同的时间和pi检查病毒或两者的混合物0.1µg /毫升的体育分数和0.01µg /毫升无环鸟苷。空斑形成单位的处理提出了文化的积极的比例控制。值意味着±SD (n = 3)。

结论

1。电子商务ethanolic提取显示强大的抗病毒活性对不同疱疹病毒的家庭成员(1型单纯疱疹病毒,HSV-2和带状疱疹)。

2。80%的甲醇的一部分电子商务是最能有效对抗所有测试病毒的抗病毒与SI显著更高的粗提物,甚至高于无环鸟苷。

3所示。似乎80%甲醇的一部分电子商务干扰抑制等病毒感染的不同阶段的早期感染(病毒吸附/渗透进入宿主细胞),可能阻塞一个或多个步骤在宿主细胞内的病毒复制后渗透。这种效应在不同阶段的病毒感染可以通过不同的组件的EC分数。

4所示。一个强大的合作抗病毒活性的80%甲醇分数之间被发现电子商务和无环鸟苷。

5。需要进一步研究的隔离和净化抗病毒活性成分的80%甲醇的一部分电子商务。

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