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提交:2021年2月13日|批准:2021年2月25日|发表:2021年2月26日

本文引用:Ostojic M, Hubana M, CvetnićM, BenićM, Cvetnićz抗菌素耐药性克雷伯氏菌肺炎菌株分离尿液住院病人和门诊病人。生物科技拱》生物医学。2021;5:001 - 007。

DOI:10.29328 / journal.abb.1001021

版权许可:©2021 Ostojic, et al。这是一个开放存取物品在知识共享金博宝app体育归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。

关键词:克雷伯氏菌肺炎;抗生素耐药性;ESBL菌株;住院病人;门诊病人

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抗菌素耐药性的克雷伯氏菌肺炎菌株分离尿液住院病人和门诊病人

Maja Ostojic1,马希尔·Hubana2,Marija Cvetnić3,Miroslav Benić4,Cvetnić2 *

1微生物学和分子诊断、大学临床医院的莫斯塔尔,波斯尼亚和黑塞哥维那
2莫斯塔尔大学学院制药、波斯尼亚和黑塞哥维那
3克罗地亚萨格勒布大学兽医学院
4克罗地亚兽医研究所,克罗地亚

*通信地址:Željko Cvetnić兽医学博士,博士学位,教授微生物学,Matice Hrvatske BB, 88000莫斯塔尔,波斯尼亚和黑塞哥维那,Tel: + + 387 36 312 791;传真:+ + 387 36 312 791;电子邮件:cvetnic@veinst.hr

背景:克雷伯氏菌肺炎是一个人类物种经常引起细菌感染。感染最常出现在住院或免疫功能低下的患者,用抗菌素治疗。近几十年来,k .肺炎开发了许多抗菌素重大阻力。

摘要目的:本研究的主要目的是确定电阻的孤立的频率k .肺炎菌株从住院病人和门诊病人的尿液样本,并发现ESBL菌株及其对某些抗生素产生抗药性。

方法:在研究期间,克雷伯氏菌肺炎是孤立的430名患者的尿液样本。尿液样本的处理过程,识别、磁化率对抗菌素和ESBL菌株的证据进行了根据推荐的标准。

结果:占总数的k .肺炎隔离,153(35.6%)被孤立的从医院从门诊病人和277例(64.4%)。菌株分离从医院患者每个测试的抗生素耐药。ESBL菌株被发现在169年(39.30%)样品,从住院病人92例(60.13%)和77年(27.8%)从门诊病人。

结论:菌株的k .肺炎从住院病人和门诊病人的尿液分离开发重要的抵抗所有测试抗生素物质。更高的ESBL菌株发生比在门诊住院病人中观察到。ESBL菌株耐青霉素和头孢菌素几乎所有。高度有效的抗菌素是阿米卡星、colistine碳青霉烯和磷霉素。最好的治疗结果当患者接受磷霉素和imipenem实现。

克雷伯氏菌肺炎(k)是一个物种,常常导致人类感染。作为一个主要的病原体,它通常会导致肺炎和泌尿道感染[1]。细菌作为同桌的主要生活在人类和动物的消化系统,但在环境中也很普遍。感染最常出现在住院或免疫功能低下的患者,和通常对待ß内酰胺抗生素对肠道菌和其他抗生素[2]。由于其快速传播,克雷伯氏菌感染是第三个最常见的医院感染(9.9%),在美国艰难梭状芽胞杆菌金黄色葡萄球菌k .肺炎引起严重的感染包括肺炎、尿路感染和循环[3]。的爆发克雷伯氏菌引起感染的原因往往是由于新出现耐药菌株与扩展光谱β内酰胺酶生产(ESBL)[4],和他们的频率多年来一直增加。的增加趋势的发生克雷伯氏菌感染在东欧[5]尤其明显。环境是一个重要的源和热源的k .肺炎,并经常与水、污水、土壤和植物表面。123年地表水样品,在一项研究中克雷伯氏菌菌株被分离从样本的53%k .肺炎作为主要物种[6]。最近的研究也表明,高致病性k .肺炎菌株含有电阻和类似发现在人类菌株毒力基因,通常是发现在猫和狗等宠物。高相似性表明菌株之间隔绝宠物和人类泌尿系感染和高致病性的克隆

k .肺炎(> 86.7%)。因此,主人和宠物处理程序必须谨慎,防止感染的传播[7]。

最常见的传播方式之一k .肺炎在医院环境卫生保健专业人员和病人之间的直接联系。仪器的污染的表面也被发现感染来源[8]。的传播k .肺炎在社区被认为是低于医院。鼻咽的殖民成人比儿童(15%高vs。7%)。主要的传播方式是穷人食物和水卫生[9]。胃肠系统是一个重要的储层k .肺炎和感染源,因为它往往是殖民[10]。尿路感染是最常见的人类感染和代表与高经济影响的一个重要的公共卫生问题。由于抗生素的广泛使用治疗尿路感染,抗菌的阻力肠杆菌科,尤其是主要的尿路病原体大肠杆菌和k .肺炎,全世界已经显著增加。患病率的增加阻力肠杆菌科对最常用的抗生素限制了可用性这些细菌引起的感染的治疗[11]。克雷伯氏菌产ESBL抗多种抗生素,包括氨基糖甙类、氟喹诺酮类、四环素、氯霉素、甲氧苄氨嘧啶+ sulfametoxazole,青霉素和头孢菌素[12]。ESBL菌株引起的感染只能被碳青霉烯,如imipenem meropenem,厄他培南等人[13],尽管碳青霉烯应该尽可能避免,作为最后一道防线的一个高度耐药菌株感染如果没有其他有效的抗生素抗感染。这样的病例在印度、欧洲和世界各地的[14]。

本研究的主要目的是确定的耐药模式k .肺炎隔离从住院病人和门诊病人,以确定k .肺炎的抗性和敏感程度之间的隔离,并确定关联的阻力模式与病人性别和年龄。最后,目的是表达耐药的ESBL菌株的比例k .肺炎住院病人和门诊病人。

研究进行了从2018年1月至12月研究所的微生物学和分子诊断的莫斯塔尔大学临床医院(波斯尼亚和黑塞哥维那)。医院患者承认莫斯塔尔大学临床医院和样本期间拍摄的。门诊病人尿液样本被送到研究所的微生物学和分子诊断、莫斯塔尔大学临床医院根据医生的指示从初级卫生保健。

总共有430k .肺炎菌株分离尿液样本进行分析。在研究期间,153株分离从277住院病人和门诊病人。

隔离和孤立的细菌的识别

尿液样本,10毫升的中间流。在特殊情况下住院患者的尿液被导管。尿液样本接种在大众化的麦肯基(5%血琼脂)和选择性琼脂(英国Oxoid)和孵化24小时恒温器在37°C。革兰氏阴性细菌被标准的微生物方法确定。

表型和生化特性,发展殖民地进行评估以识别克雷伯氏菌。麦肯基的殖民地培养琼脂和血液琼脂。麦克恩琼脂的殖民地是直径3毫米,粘液和乳糖积极。殖民地在血琼脂出现灰色的彩色,闪亮的菌落直径3毫米。商用基质(英国Oxoid)被用来avaluate疑似的生化特性克雷伯氏菌殖民地如Kligler琼脂(包含两个糖),SIM介质(硫化、吲哚、能动性)和柠檬酸琼脂。24小时后孵化在37°C克雷伯氏菌发酵葡萄糖和乳糖生产气体在增长。细菌是non-motile,不会产生H2年代,它是吲哚-和柠檬酸发酵。最后使用自动识别进行了封闭系统的识别和检测敏感性VITEK - 2紧凑(BioMerieux、法国)根据制造商的指示(1、15)。

识别后,隔离被提交给敏试验对抗菌素使用Kirby鲍尔纸片扩散法。五个殖民地的新鲜培养菌株(隔夜文化)捡起来用接种环和2毫升无菌生理盐水稀释。悬架是涡为了创建一个平滑的悬架和浊度是根据麦克法兰调整到0.5。悬浮在米勒辛顿琼脂表面接种后15分钟内准备用无菌棉拭子浸入培养液管。多余的液体被旋转的拭子在一边管(液面以上)使用公司的压力。MH琼脂板的表面被裸奔擦拭三次接种整个琼脂表面;每次旋转板约60度,以确保接种体的均匀分布。接种板干了几分钟。磁盘应用琼脂表面牢固的15分钟内接种的盘子。应用抗菌素磁盘,15分钟内板倒,孵化35岁±1°C - h。孵化后,抑制区域是阅读时没有明显的增长被肉眼发现板时持有约30厘米的眼睛。 The inhibition zone diameters are measured to the nearest millimetre with a ruler. The procedure is standardized and the results are interpreted according to EUCAST [16]. We tested bacterial isolates for the following substances: amikacin (AKN) 30 µg, amoxicillin (AMX) 25 µg, amoxicillin + clavulanic acid (AMC) 20/10 µg, ampicillin + sulbactam (SAM) 10/10 µg, ceftazidim (CZD) 10 µg, ceftriaxone (CRO) 30 µg, cefuroxime (CXM) 30 µg, cefazolin (CZN) 30 µg, cefoperazone (CPZ) 30 µg, cefotaxime (CTX) 30 µg, ciprofloxacin (CIP) 5 µg, fosfomycin (FSF) 50 µg, gentamicin (GMN) 10 µg, levofloxacin LVX) 5 µg, nitrofurantoin (NFE) 100 µg, pefloxacin (PEF) 5 µg, piperacillin (PIL) 30 µg, trimethoprim + sulfamethoxazole (SXT) 1.25/23.75 µg, ertapenem ETP) 10 µg, meropenem (MEM) 10 µg, imipenem (IPM)10 µg, colistin (COL) 10 µg (Bio Rad, France).

测试菌株k .肺炎ESBL生产

ESLB的生产是由双盘协同测试(DDST)方法。筛选和确认测试检测ESBL菌株进行有效的标准(临床和实验室标准协会)和EUCAST [19]。光盘包含ceftazimidin (CAZ 30),阿莫西林+克拉维酸(AMC10/10)和头孢曲松(CRO30)放在穆勒辛顿的琼脂表面接种细菌悬液的密度根据麦克法兰(0.5)。光盘中心之间的距离是20毫米。盘子在37°C孵化18 - 24小时。孵化后,盘之间的协同作用是评估。最小的信号盘之间的合作被认为是一个积极的测试结果,即。,应变能力扩展频谱ß内酰胺酶(ESBL)。

统计分析

Mac OSX的IBS SPSS统计统计软件包(SPSS公司版本23日,芝加哥,伊利诺斯州,美国)是用于数据分析。

卡方检验(χ2)是用来比较的差异之间的感染发生住院病人和门诊病人的性别。卡方检验(χ2)和费舍尔准确测试被用来比较细菌敏感性的差异对抗菌素孤立从住院病人和门诊病人。学生的t——测试是用来比较的年龄差异住院病人和门诊病人。概率小于0.05被认为是具有统计学意义。

总数的k .肺炎患者尿路感染,153(35.6%)277(64.4%)被门诊,住院,这种差异具有统计学意义(χ2= 35.75;df = 1;p< 0.05)。

更频繁地感染确诊女性(244%或56.74%)比男性(186%或43.26%)的患者。假设感染发生在相同的频率在两种性别中,观察到的差异在性别分布是统计学意义(χ2= 7.82;df = 1;p< 0.05)。

病人的年龄介于15至95岁,平均年龄为66.14岁(SD = 18.07)。男性患者的平均年龄为69.02岁(SD = 15.87)和女性为63.93岁(SD = 19.33),并观察到患者年龄,性别的差异具有统计学意义(t= 2.992;df = 424.4;p= 0.003)。

敏感性分析的模式k .肺炎从医院和医院以外的病人显示菌株分离孤立从医院患者对每一个测试的抗生素,除磷霉素(表1)。

表1:频率的阻力和分离的菌株的敏感性k .肺炎从住院病人和门诊病人对某些抗生素。
抗生素 指定 N 医院的病人 外住院病人 p
% 耐药 敏感的 耐药 敏感的
阿米卡星 AKN
30µg
N 4 82年 3 71年 > 0.05
% 4.65 95.35 4.05 95.95
阿莫西林 AMX
25µg
N 101年 0 171年 7 > 0.05
% One hundred. 0 96.07 3.93
阿莫西林+
克拉维酸
AMC
20/10µg
N 57 28 85年 106年 0.0005
% 67.06 32.94 44.50 55.50
氨苄青霉素+
sulbactam
山姆
10/10µg
N 60 2 62年 8 > 0.05
% 96.77 3.23 88.57 11.43
Ceftazidim CZD
10µg
N 72年 39 61年 147年 < 0.0001
% 64.86 35.14 29.33 70.67
头孢曲松钠 阴极射线示波器
30µg
N 74年 42 64年 152年 < 0.0001
% 63.79 36.21 29.63 70.37
头孢呋辛 CXM
30µg
N 91年 54 80年 168年 < 0.0001
% 62.76 37.24 32.26 67.74
头孢唑啉 CZN
30µg
N 16 7 14 21 0.02751
% 69.57 30.43 40 60
头孢哌酮 CPZ
30µg
N 18 19 11 45 0.0031
% 48.65 51.35 19.64 80.36
头孢噻肟 CTX
30µg
N 18 20. 13 51 0.004
% 47.37 52.63 20.31 79.69
环丙沙星 CIP
5µg
N 58 50 69年 132年 0.0009
% 53.70 46.30 34.33 65.67
磷霉素 FSF
50µg
N 0 54 2 86年 > 0.05
% 0 One hundred. 2.27 97.72
庆大霉素 GMN
10µg
N 57 44 63年 140年 < 0.0001
% 56.44 43.56 31.03 68.97
左氧氟沙星 LVX
5µg
N 7 9 2 14 > 0.05
% 43.75 56.25 12.50 87.50
呋喃妥英 NFE
100年µg
N 49 88年 80年 178年 > 0.05
% 35.77 64.23 31.01 68.99
Pefloxacin PEF
5µg
N 8 15 14 29日 > 0.05
% 34.78 65.22 32.66 67.44
哌拉西林 公益诉讼
30µg
N 71年 0 69年 1 > 0.05
% One hundred. 0 98.57 1.43
甲氧苄氨嘧啶+
磺胺甲恶唑
SXTµg 1.25/23.75 N 45 66年 63年 178年 0.006
% 40.54 59.46 26.14 73.86
厄他培南 ETP
10µg
N 6 81年 1 71年 > 0.05
% 6.9 93.1 1.39 98.61
Meropenem MEM
10µg
N 2 75年 1 73年 > 0.05
% 2.60 97.40 1.35 98.65
Imipenem IPM
10µg
N 2 69年 0 62年 > 0.05
% 2.82 97.18 0 One hundred.
粘菌素 10µg上校 N 3 68年 1 57 > 0.05

430年的分析分离k .肺炎ESBL生产中检测出169株(39.30%)分析。ESBL阳性菌株,92名(60.13%)来自医院的患者(153年的分析),和77年(27.8%)来自门诊病人。菌株能够合成ESBL在111年被发现(66.07%)的男性和女性58例(34.53%)。观察到的不同性别之间的ESBL菌株的分布在统计学上意义重大。更频繁的男性患者感染菌株能够产生ESBL(χ2= 16.095;DF = 1;p< 0.05)。

表2显示了产ESBL菌株对不同抗生素的敏感性两个病人组。

表2:易感性的ESBL菌株k .肺炎对某些抗生素住院病人和门诊病人。
抗生素 医院ESBL菌株 外医院ESBL菌株
N 灵敏度ESBL菌株 N 灵敏度ESBL菌株
数量 % 数量 %
阿米卡星 88年 84年 95.46% 70年 67年 95.71%
阿莫西林 80年 0 0% 71年 0 0%
阿莫西林+克拉维酸 71年 1 1.41% 68年 0 0%
氨苄青霉素+ sulbactam 80年 0 0% 69年 3 4所示。35%
Ceftazidim 76年 1 1.32% 61年 1 1.64%
头孢曲松钠 78年 1 1.28% 66年 1 1.52%
头孢呋辛 70年 0 0% 58 0 0%
头孢唑啉 76年 5 6.57% 64年 6 10.61%
头孢哌酮 73年 0 0% 68年 0 0%
头孢噻肟 74年 0 0% 64年 0 0%
环丙沙星 75年 20. 26.67% 69年 9 13.04%
磷霉素 77年 77年 100% 69年 67年 97.10%
庆大霉素 81年 12 14.8% 66年 8 12.12%
哌拉西林 83年 0 0% 61年 0 0%
呋喃妥英 69年 34 49.28% 68年 36 52.94%
Pefloxacin 79年 20. 25.3% 68年 19 27.94%
甲氧苄氨嘧啶+磺胺甲恶唑 78年 32 41.03% 71年 25 35.21%
厄他培南 80年 74年 92.50% 76年 75年 98.68%
Imipenem 87年 85年 97.7% 73年 68年 93.15%
Meropenem 86年 84年 97.67% 75年 74年 98.67%
粘菌素 82年 78年 95.12% 73年 68年 93.15%
护士:ESBL菌株对个人抗生素治疗。

尿路感染是最常见的细菌感染,往往是来访的卫生机构的原因。大多数这些感染是在初级卫生保健设施接受治疗。然而,抵抗抗生素用于治疗尿路感染正在上升[20],住院患者数量的增加和抗菌素耐药性的增加。近几十年来,医院治疗尿路感染的急剧增加,抗生素和抗标准已经成为很常见的[21]。

在这项研究中,耐药模式k .肺炎与住院病人和门诊病人泌尿系感染某些抗生素。这些数据主要是提供洞察成功治疗这些感染的可能性。耐青霉素非常普遍,因此青霉素不能被认为是一个可靠的抗生素在与感染所致k .肺炎。可接受的结果通过使用头孢菌素、氟喹诺酮类原料药或庆大霉素,达到了满意的治疗效果与呋喃妥英甲氧苄氨嘧啶+ sulfomethoxazole。最好的治疗成功预计碳青霉烯和colistine最后一行国防抗生素、阿米卡星和磷霉素。磷霉素是特别成功,因为只有2 142隔离表示抵抗它,和它的效果等于imipenem比厄他培南和meropenem。从1998年到2010年在美国进行的一项研究显示,一个常数的阻力增加的趋势k .肺炎对抗生素。抵抗sulfametoxazole +甲氧苄氨嘧啶在2010年达到10.9%,1998年上升到19.3%,而在同一时期,对环丙沙星的耐药性从5.5%上升到16.8%。克雷白氏肺炎隔离我们的研究显示,40.5%耐药对sulfametoxazole +甲氧苄氨嘧啶从医院门诊患者和26.4%,而对环丙沙星的耐药性是53.7%的隔离从门诊住院病人和34.3%。电阻在更广泛的地区更加明显由于不适当和不受控制的使用抗生素。抵抗阿米卡星从0.7%上升到4.5%在我们的研究中,而在这项研究中达到4.6%。电阻对imipenem中没有检测到我们在研究的开始(1998)但最终达到4.3% [22]。在这项研究中,分离从住院病人的抗imipenem是2.8%。这些发现证实了新病毒出现。这些菌株对碳青霉烯耐药(CRKPA)和在未来可能会带来一个严重的问题。在2000年,只有不到1%的k .肺炎隔离是对碳青霉烯耐药,而在2007年增长到8% (22、23)。在孟加拉国的一项研究显示100%的克雷白氏肺炎对氨苄青霉素、电阻率90%阿莫西林,头孢曲松钠,45%对庆大霉素对环丙沙星40%,25%,35%四环素。这项研究的结果更接近这里给出的结果,和远离理想值[24]。

菌株分泌ß-lactamase扩展频谱(ESBL)在德国首次出现在1980年代,和已经在世界范围内传播,构成一个大问题。ESBL生产中检测出革兰氏阴性杆状细菌,多数检测肠杆菌科家庭[25]。患病率ESBL菌株引起的感染是最常见的k .肺炎在医院环境中隔离,达到约25%,尽管在一些研究从30%变化到80% (25、26)。在这项研究中,ESBL菌株k .肺炎169名(39.3%)患者中发现,92年分离株(60.13%)与住院病人和77隔离(27.8%)来自门诊病人。根据文献,菌株能够产生在欧洲ESBL不同在斯堪的纳维亚国家和荷兰不到5%,50%以上在希腊

和波兰。的能力k .肺炎在克罗地亚产ESBL菌株分离取决于起源和达到约56%在入侵隔离和34%临床分离株中,卫生机构之间的显著变化[27]。产ESBL菌可能不同的频率在一个地理区域,甚至在一个国家。先前一些调查的结果是34%的频率在葡萄牙、意大利的37%,44%在美国,30% - 60%的拉丁美洲国家,58%在土耳其[28]。抗生素的选择尤为重要,在严重影响患者ESBL生产引起的感染k .肺炎。本研究证实,青霉素和头孢菌素是成功治疗ESBL菌株引起的感染,氟喹诺酮类原料药不到30%的患者可以治愈。呋喃妥英大约有50%的患者是有效的。好的结果,成功率超过95%,与碳青霉烯治疗,观察粘菌素、amicacin和磷霉素。cabazenem管理,主要是imipenem,预防感染死亡率ESBL菌株与其他抗生素的使用[29]。碳青霉烯的疗效已被证实在印度、美国、以色列、希腊、和在许多欧洲国家,包括克罗地亚。几乎所有替代抗生素对感染是低效的产ESBL k .肺炎。抵抗是观察甚至反对抗菌素仍在发展。因此,有越来越多的人意识到可能不能治愈危及生命的未来carbonate-insensitive菌株引起的感染(30、31)。ESBL菌株的最高频率与病人年龄是决定在上面的年龄65岁。 Regarding gender, the affection rate of the pathogen and the body site from which the isolates originated, our findings are in accordance with similar studies, confirming females as the more frequently infected gender and the urinary tract as a commonly affected body system [32,33].

基于这些结果,可以得出结论,感染分离的频率k .肺炎物种决心在35.6%的住院病人和门诊病人的64.4%。感染更频繁地发生在女性患者和患者超过65岁。k .肺炎开发重要的抵抗每个测试抗生素,除磷霉素、碳青霉烯、阿米卡星和胆碱。头孢菌素的功效,氟喹诺酮类、氨基糖甙类和trimethoprima + sulfametaxel是令人满意的,和最有效的药物是困难的情况下保持治疗感染是碳青霉烯,amicacin, colistine和磷霉素。有ESBL菌株的发生率较高(39.35),在住院更常见(60.13%)比non-hospitalised病人(27.8%)。ESBL菌株对青霉素和几乎所有头孢菌素耐药,甚至对第三代头孢菌素和不到2%的情况下导致治疗。在不到一半的情况下,感染可以使用氟喹诺酮类原料药治愈、庆大霉素和甲氧苄氨嘧啶+ sulfomet-oxazole。呋喃妥英在大约50%的情况下是有效的。Amicacin colistine,碳青霉烯和磷霉素是非常有效的,尽管取得了最好的效果当磷霉素和imipenem用于治疗感染。

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