五十九隔离属于六种Enterococci也就是说,肠球菌粪,肠球菌都有效,肠球菌raffinosus,肠球菌杜兰,肠球菌mundtii和肠球菌鸟结核(n3 = 35岁,15日,4日,1和1分离,分别)获得不同的临床标本包括尿液、脓、痰血,伤口,和滑液。最高的数字Enterococci记录从脓(20例,33.90%),其次是尿液(12隔离,20.34%)而频率最低的是观察滑液样本(2隔离,3.39%)。这些隔离显示不同的耐药模式最低的抗性为linezolid (n= 5,8.48%),其次是teicoplanin (n= 14人,23.73%)和万古霉素(n= 20,33.90%),他们表现出对青霉素耐药(最高n苯唑西林= 53岁,89.83%),(n= 50,84.75%)、红霉素(n= 49,83.05%)和链霉素(n= 47岁的79.66%)。另一方面,一个自由生活海洋细菌隔离代码ESRAA3010下从海水样品中分离得到的捕鱼区Masturah,红海,吉达,沙特阿拉伯。表型,chemotaxonomic 16 s rRNA基因分析和系统数据证明隔离ESRAA3010非常接近芽孢杆菌细小然后它被指定为芽孢杆菌细小ESRAA3010。它给了最高的敌对活动对所有临床肠球菌粪,肠球菌都有效,肠球菌raffinosus,肠球菌杜兰,肠球菌mundtii和肠球菌鸟结核隔离和最低抑制浓度(MIC)正在研究范围从4 - 56µg /毫升,4 - 12µg / mL, 4到8µg /毫升,4到8µg /毫升,8µg /毫升和4µg /毫升,分别和最低杀菌浓度(MBC)(8到64µg / mL, 4到16µg /毫升,4 - 12µg / mL, 4 - 16µg /毫升,12µg /毫升和8µg /毫升,分别)。此外,它显示anti-proliferative活动对结肠(hct - 116),肝脏(HepG-2),乳腺癌(MCF-7)和肺癌与IC (a - 549)癌₅₀等于39岁、50、75和19µg /毫升,分别指出其潜在的使用在即将到来的几十年。

肠球菌物种是革兰氏阳性球菌通常存在于人类,有时成为严重感染;尤其是他们经常发现小说机制逃避抗生素治疗[1,2]。他们开发了不同抗生素常用的多药耐药性(MDR)患病率明显增加,接触表面污染和设备或感染者[3]。他们获得越来越多的担忧,由于设施承受各种抗菌药物的影响,因此限制了药物的选择和导致更高的死亡率和发病率[4]。因此,找到替代的强大,廉价的和无害的天然药物耐药细菌可以有效的方法解决这一严重的全球问题[5 - 7]。海洋细菌承诺水库多样有效的生物活性天然产物,他们当中的很多人被用于化疗治疗人类疾病特别是针对耐药病原体的需要新的有效的化合物和管理痛苦癌症高选择性活动和低毒性(8、9)。红海宿主多样性和丰富的自由生活微生物能够产生有前途的生物活性的海洋天然产物[10]。海洋芽孢杆菌物种产生多功能生物活性化合物包括lipopeptide,多肽,macrolactone、脂肪酸、酮化合物和异香豆素代谢产物(11、12)各种抗真菌、抗菌、抗氧化和抗增殖活动(13、14)。的能力芽孢杆菌物种不同抗生素生物合成不同结构已经被众多的基因研究,证明和遗传分析芽孢杆菌压力显示,大约8%的基因组致力于抗生素合成(15、16)。这项工作的目的是评估的发生率和分布Enterococci在病人承认El-Demerdash教学医院(埃及开罗)连同他们的抗生素敏感性测定资料对面板的抗生素选择耐药Enterococci(MDRE)。此外,本研究旨在探讨有效的海洋芽孢杆菌物种能够产生生物活性物质对这些临床分离株和多样化的恶性细胞系包括结肠癌、肝癌、乳腺癌和肺癌癌。

临床标本

不同的样本包括尿、脓、血、伤口、痰和滑液(5为每个样本)收集的范围从1到60岁以上患者(15女性和15名男性)承认智能卡U(重症监护病房)、手术、糖尿病、皮肤性病,血液学,紧急情况下,“T(耳朵、鼻子和喉咙)和神经病学单位El-Demerdash教学医院,埃及开罗。样品被带到实验室冰条件下并及时处理。五十个九Enterococci分离获得参与这项工作。此外,肠球菌粪写明ATCC 19433,肠球菌都有效写明ATCC 19434,肠球菌raffinosus写明ATCC 49427,肠球菌杜兰写明ATCC 19432,肠球菌mundtii写明ATCC 43186和肠球菌鸟结核写明ATCC 14025菌株作为参考。不同的样本包括尿、脓、血、伤口、痰和滑液(5为每个样本)收集的范围从1到60岁以上患者(15女性和15名男性)承认智能卡U(重症监护病房)、手术、糖尿病、皮肤性病,血液学,紧急情况下,“T(耳朵、鼻子和喉咙)和神经病学单位El-Demerdash教学医院,埃及开罗。样品被带到实验室冰条件下并及时处理。五十个九Enterococci分离获得参与这项工作。此外,肠球菌粪写明ATCC 19433,肠球菌都有效写明ATCC 19434,肠球菌raffinosus写明ATCC 49427,肠球菌杜兰写明ATCC 19432,肠球菌mundtii写明ATCC 43186和肠球菌鸟结核写明ATCC 14025菌株作为参考。

临床细菌分离和鉴定

肠球菌隔离被孤立,根据传统的方法和生化特征关键以前报道[17-23]。

临床抗生素敏感性的状况肠球菌的隔离

抗菌感受性测试Enterococci物种完成后磁盘使用穆勒辛顿琼脂扩散技术(MH)基于世界卫生组织[24]和采用自愿性标准的临床实验室标准协会(25、26)和欧洲委员会药敏测试[27]对一组13抗生素包括青霉素10 IU,环丙沙星5μg,链霉素10μg,万古霉素30μg庆大霉素10µg,四环素30μg,卡那霉素30µg linezolid 10µg,氯霉素30µg teicoplanin 30µg,呋喃妥英100µg,红霉素15μg苯唑西林和5µg (Oxoid贝辛斯托克,汉普郡,英格兰在µg /磁盘)。

海洋样品和隔离的海洋芽孢杆菌物种

十的海水样本,捕鱼区Masturah,红海,吉达,沙特阿拉伯(纬度:23°5031.4600 n /经度:49017.5200 38°e)收集在2018年8月在不同深度的螺帽瓶冰条件下。收集的样本被送往实验室,收集和处理。分离培养基和工艺准备,完成后伊万诺娃的方法,镀等。[28]系列稀释的水样本单独的营养琼脂培养皿(NA)补充100µg /毫升制霉菌素和环己酰亚胺,在30°C的环境3天,认出细菌单独的殖民地定期转移到NA 30°C 48 h和包括在这项研究中。细菌隔离保存在NA在4°C到使用。

抗菌活性的海洋细菌分离株对不同MDR -Enterococci

穆勒辛顿琼脂(MH)板注射临床MDR -Enterococci纸和隔离,单独分析光盘含有30μL海洋细菌的分离出上层清液分别镀在接种培养基,在37°C孵化24小时然后抗菌活性的细菌隔离决心反对MDRE隔离使用常规扩散板技术通过评估的抑菌圈直径毫米(数据确定没有敌对的活动(-),弱敌对活动(˂10 mm, +),适度的敌对活动(10 - 15毫米,+ +)和优秀的敌对活动(16 -˃20毫米,+ + +)][11日29日]。

海洋细菌的表型和chemotypic属性ESRAA3010隔离

ESRAA3010应变是由传统的分类指定程序通过API 20 e和API 50 ch方法以及其他表型和chemotypic字符[29-32]。芽孢杆菌细小写明ATCC 6051 t作为标准菌株。

分子识别的隔离ESRAA3010 16 s rDNA序列分析

DNA提取、PCR扩增的16 s rRNA核糖体RNA基因,PCR产品的净化,凝胶电泳,16 s rDNA序列分析进行基于先前的报道[8 31岁到三十五]其次是调整隔离ESRAA3010的16 s rRNA基因序列与序列发表在NCBI数据库基因库(http://www.ncbi.nih.gov)。树拓扑结构是通过neighbor-joining评估方法和引导分析基于500复制MEGA-X [36-38]。

从海洋提取生物活性代谢物枯草芽孢杆菌ESRAA3010

芽孢杆菌细小ESRAA3010接种到厄伦美厄烧瓶内含有大豆胰蛋白酶的肉汤培养基培养24小时30°C和100 rpm,潜伏期后ESRAA3010菌株的发酵肉汤(5 L)收集和上层清液分离下减压,然后用乙酸乙酯提取两次(1:1,pH值4.5在一夜之间震动)。层提取得到蒸发干燥给光棕色油(6.41 g)。

确定最低抑制(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)枯草芽孢杆菌ESRAA3010提取物对Enterococci菌株。

提取的次生代谢物的麦克风和MBCµg / mL估计对MDRE隔离所述卡布奇诺和谢尔曼[39]Lavermicocca, et al . [40]。

测定anti-proliferative活动(MTT测定)芽孢杆菌细小ESRAA3010结肠(HCT - 116),肝脏(HepG-2)、乳腺癌(MCF-7)和肺癌癌(a - 549)。

细胞生存能力测试是衡量线粒体的依赖减少肝癌和黄色(3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5 -二苯溴化四唑)到紫色甲瓒(第四十一条、第四十二条)。hct - 116、MCF-7 HepG-2和a - 549实现从癌症中心,卡罗林斯卡研究所,Stokholm,瑞典;antibiotic-antimycotic DMEM培养基,RPMI 1640中型和1% (10000 U /毫升青霉素钾;10000μg /毫升硫酸链霉素和25μg /毫升两性霉素B)是实现从生活技术/ Gibco(美国纽约大岛)。不同数量的的影响枯草芽孢杆菌将有关- 3010 25和300µg /毫升不等的提取这些肿瘤细胞株的细胞毒性和细胞生存所测量Mosmann威尔逊[41]和[42]在96孔酶标37°C下5%二氧化碳使用水夹套二氧化碳培养箱(谢尔顿,TC2323,科尼利厄斯,或者美国)48 h后吸气中,添加40μL MTT盐(2.5μg /毫升)井,酝酿4 h在37°C如上所述,结束反应随着溶解导致晶体通过添加200μL 10%十二烷基硫酸钠井,从而酝酿在一夜之间在37°C。吸光度是估计为595 nm的微型板块多井读者(Bio-Rad实验室公司3350型,赫拉克勒斯,加州,美国。的集成电路₅₀(的提取细胞生存能力降低了50%)相比,控制(井只包含溶剂没有提取)使用SPSS 11程序决定。百分比(%)的细胞异常估计基于公式:[(吸光度细胞系使用提取/负吸光度控制)1]X 100。

分离、鉴定和临床的发生Enterococci隔离

总共五十九分离株革兰氏阳性Enterococci隔离包括16日,11日,8、5、10和9隔离孤立于年龄1 - 6,˃6 - 12,˃12-20,˃- 40,˃40 - 60岁(表1)。MDRE(27.12%)最多的收集范围从1到6岁。此外,33个分离株(55.93%)从男性样本而获得26个分离株(44.07%)来自女性参与者从El-Demerdash教学医院(表1)。耐药的存在Enterococci隔离在人类社会作为一个来源为医院感染[1]。与我们的结果一致,他们包括,et al。[4]显示的优势Enterococci隔离实现从年龄组清廉(20.9%),之后,年龄20 - 30(19.8%)以及检测感染在男性参与者的高发病率。Enterococci被认为是独特的医院感染原因削弱了患者的免疫系统。另一方面,表2显示了不同部门收集的标本,17 (28.81%);16 (27.12%);8 (13.56%);7 (11.86%);5 (8.48%);4 (6.78%);1(1.70%)和1(1.70%)将获得从智能卡U(重症监护病房)、手术、糖尿病、皮肤性病,血液学,紧急情况下,“T(耳朵,鼻子和喉咙)和神经学部门,分别表明住院的重症监护室MDRE殖民是一个重要的风险因素和发生。 Similar distribution observation were reported previously in resistantEnterococci比较从不同的人形感染[19],在克什米尔临床样本;印度北部[43]、卫生保健设置[3],三级护理中心,尼泊尔东部[4]和土耳其[1]。

的临床特点肠球菌菌株

在物种的标准准则规范(2日),六种不同的Enterococci隔离,即粪大肠,大肠都有效,大肠raffinosus,e·杜兰,大肠mundtii和e .鸟结核(n3 = 35岁,15日,4日,1,1,表3分别。Voges-Proskauer non-motile隔离都是革兰氏阳性,阳性反应,对过氧化氢酶活性和β-glucoronidase不利,产生酸山梨糖醇、乳糖和增长45°C和pH值9.6。只有大肠mundtii能够产生黄色素这一物种的一个关键特性是除了从海藻糖产酸;e·杜兰是唯一从鼠李糖-酸生产菌株,松三糖、阿拉伯糖、甘露醇和e .鸟结核是唯一一株未能产生从美沙酮酸,但明胶水解能力只是记录在吗粪大肠菌株的其他细节(表3)。这些物种的表型特征和chemotypic特性在当前的研究中获得的展示在表3。有趣的是粪大肠和大肠都有效(图1和图2)共同构成比例超过84.74%的总隔离和增加在目前的工作可能归因于自己的能力获得和发展不同模式对多种抗生素的耐药性。在大多数先前的报道,粪大肠已经被记录为主要Enterococci物种,紧随其后的是大肠都有效。例如他们,等。[4]报道,在七个不同种类的识别Enterococci频率最高的菌株总隔离报告之一粪大肠紧随其后的是大肠都有效和在一起,它们由超过90%的总隔离。然而,这个结果比其他研究(44岁,45岁)。这些细菌发生的差异可以归因于不同的地理网站,样本,住院期间,和毒品使用[46]。

Enterococci物种分布在各种临床标本

在59岁的总数Enterococci隔离,12(20.34%)、20(33.9%),9例(15.25%),10例(16.95%),6(10.17%)和2(3.39%)从尿液中恢复过来,脓,血,伤口,痰和滑液样本,分别(表4)。在分析分布的6Enterococci各种临床标本的物种,我们发现8例(13.56%),11(18.64%),6例(10.17%),5例(8.48%),3(5.09%)和2 (3.39%)粪大肠(n= 35岁,59.32%)和3(5.09%),5例(8.48%),3例(5.097%),3例(5.097%),1(1.70%)和0(0.00%)的隔离大肠都有效(n= 15,25.42%)和1(1.70%)、2(3.39%)、0例(0.00%),1例(1.70%),0(0.00%)和0 (0.00%)大肠raffinosus(n= 4,6.78%)从尿液、脓,血,伤口,痰和滑液样本,分别。而且只有3隔离的e·杜兰(1孤立从脓痰和2分离),大肠mundtii从脓分离(1)e .鸟结核(1孤立从伤口)被孤立的(表4)。在协议与我们的结果,他们包括,et al。[4]九十一分离分析肠球菌从大量临床样本,其中最高的Enterococci隔离发病率报道从尿脓和血(分别为61.5%、19.8%和5.5%)。

抗生素敏感性的模式Enterococci隔离

在当前的工作,磁化率的模式Enterococci隔离阀瓣扩散法对常用的抗生素在表5显示所有Enterococci隔离是耐药(MDRE)由于他们显示co-resistant许多类抗生素在同一时间。耐多药耐药(MDR)是特定的临床表型特征Enterococci菌株[1,47]。对青霉素耐药报告(最高n苯唑西林= 53岁,89.83%),(n= 50,84.75%)、红霉素(n= 49,83.05%)、链霉素(n= 47岁,79.66%)、环丙沙星(n= 42岁,71.19%)、卡那霉素(n= 41岁,69.49%)、四环素(n= 40,67.80%)、庆大霉素(n= 33,55.93%)、氯霉素(n52.54%)和呋喃妥英(= 31日n= 29岁,49.15%),但耐药检测linezolid(最低n= 5,8.48%),其次是teicoplanin (n= 14人,23.73%)和万古霉素(n= 20 33.90%)(表5)。他们,等。[4]表示,最高频率的易感性的隔离Enterococci之后指出了linezolid teicoplanin然后庆大霉素(分别为97.8%、95.6%和81.3%)。有趣的是94.29%,88.57%,42.86%,85.71%,80.0%,31.43%,77.14%,100.00%,11.43%,25.71%,57.14%,85.71%和94.29%粪大肠分离比例为93.33%,80.00%,20.00%,20.00%,33.33%,60.00%,66.70%,86.67%,6.67%,26.66%,46.67%,53.33%和86.67%大肠都有效隔离显示耐青霉素、链霉素、庆大霉素、四环素、万古霉素,nivtrofurantoin,环丙沙星,红霉素,linezolid,分别teicoplanin、氯霉素、卡那霉素和新青二,但是大肠raffinosus,e·杜兰,大肠mundtii和e .鸟结核物种表现出更少的对这些抗生素抗性程度(表5)。所有抗生素研究积极的电阻率越高证明同意在我们的工作与其他研究(2、3、20),可以归因于低这些抗生素和蛋白质结合位点之间的亲和力大肠都有效,大肠raffinosus,e·杜兰,大肠mundtii和e .鸟结核或/和plasmid-encodedβ-lactamase和其他抗生素降解酶在一些菌株比其他[6、48]。我们的研究结果与许多研究报道一致粪大肠作为最常见的物种从住院病人对不同抗生素的多药耐药性包括万古霉素(44岁49)。相反地他们,等。[4]建议大肠都有效株高耐抗生素研究下粪大肠但e·杜兰测试显示没有任何抵抗的抗生素。

隔离和评价敌对活动不同的海洋芽孢杆菌分离株对不同Enterococci菌株

十二个自由生活海洋的隔离芽孢杆菌物种是孤立的,种植,然后他们的敌对活动的方向Enterococci菌株在研究是评估和列表在表6所示。数据明显表明,隔离代码下的孤立ESRAA3010是极度活跃的应变显示抑制活动对所有Enterococci菌株在研究抑制功率范围从优秀的好(+ +)(+ + +)其次是ESRAA3012隔离显示抑制活动向93.22%的隔离(表6)。然后ESRAA3010应变被选为进一步研究。我们的研究结果支持先前发现的Lv, et al . Mondol, et al ., Freitas-Silva, et al。(13、14, 50)他们记录了海洋芽孢杆菌压力可以由lipopeptide生物合成多功能化合物,类胡萝卜素,多肽,macrolactone,脂肪酸,酮化合物和异香豆素代谢产物表现出广泛的生物活性,包括抗菌、抗真菌、抗肿瘤和抗氧化特性。因此,有可能用这些海洋芽孢杆菌种代谢物作为有前途的药物和其他生物治疗。

识别ESRAA3010极度活跃的细菌的表型,chemotypic和16 s rDNA分析

应变ESRAA3010呈灰白色,圆的,不透明,平台式和中型殖民地范围从干燥磅琼脂和营养琼脂光滑和滋润胰蛋白酶的大豆琼脂除了完成溶血性活动在血琼脂(表7)。这是革兰氏阳性棒,孢子形成,细胞直径约为0.8 - -0.9和2.7 - -3.2μm宽度和长度,分别(图3)。它是阳性,氧化酶、过氧化氢酶、α-galactosidase,β-galactosidase,α-glucosidase,β-glucosidase,β-fucosidase,α-arabinosidase,精氨酸氨肽酶,副总裁反应和硝酸还原;葡萄糖酸生产形式,L-arabinose、D-xylose D-mannitol D-frucrose;柠檬酸的利用率;水解的淀粉、明胶、酪蛋白和渐变80以及L-arabinose同化,D-xylose, meso-Inositol,山梨糖醇,methyl-D-glucoside, D-melibiose D-raffinose和糖原(表7)。

另一方面,消极的KOH测试,吲哚反应,氨肽酶、苯丙氨酸脱氨酶,精氨酸dihydrolase, N-benzoyl-L-leucine氨基肽酶色氨酸氨肽酶;利用丙酸和半乳糖的吸收,鼠李糖,methyl-D-mannoside, N-acetyl-glucosamine、糊精、葡萄糖酸(表7)。

此外,16 s rRNA的测序基因表现出不同的相似度99.93%枯草芽孢杆菌JCM 1465和NBRC菌株(DSM 10, 13719)。表型,chemotaxonomic 16 s rRNA基因分析和系统数据在表7和图3、4表明,隔离ESRAA3010非常接近枯草芽孢杆菌正如之前报道的[8 29-35]。然后它被指定为枯草芽孢杆菌ESRAA3010。

最低抑制(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)枯草芽孢杆菌ESRAA3010提取物对不同Enterococci菌株

表8显示层提取的数据枯草芽孢杆菌对所有ESRAA3010显示强大的敌对活动Enterococci物种正在研究。它显示麦克风对粪大肠,大肠都有效,大肠raffinosus,e·杜兰,大肠mundtii和e .鸟结核(35岁,15、4、3、1和1分离,分别)范围从4 - 56µg /毫升,4 - 12µg / mL, 4到8µg /毫升,4到8µg /毫升,8µg /毫升和4µg /毫升,分别和MBC达到8到64µg /毫升,4 - 16µg /毫升,4 - 12µg / mL, 4 - 16µg /毫升,12µg /毫升和8µg /毫升,分别。我们的数据符合Kizhakkekalam,等人,Freitas-Silva et al。(11, 50)他们证明了次生代谢物的敌对活动来自海洋芽孢杆菌物种作为潜在的抗菌药物对耐多药细菌。

Anti-proliferative活动枯草芽孢杆菌ESRAA3010提取

体外anti-proliferative活动层提取的枯草芽孢杆菌ESRAA3010菌株在不同肿瘤细胞系被MTT细胞生存能力分析评估,如图5所示。数据明显表明,a - 549的细胞生存能力完全抑制癌治疗后与ESRAA3010提取50µg /毫升的浓度(图5)。此外,hct - 116和HepG-2癌完全抑制100µg /毫升但MCF-7细胞系的生长完全被抑制的浓度与IC 200µg /毫升₅₀等于39岁、50、75和19µg对结直肠/毫升(hct - 116),肝细胞(HepG-2)、乳腺癌(MCF-7)和肺癌癌(a - 549)。类似于我们的结果签证官,et al ., Koim-Puchowska等人,Mondol et al。(7、12、14)的抗癌活动报道芽孢杆菌品种中提取大量的癌。同时,赵等。[16]报道,治疗癌的产品讲究的芽孢杆菌压力有显著的抑制影响卵巢癌、结肠癌癌扩散以剂量依赖的方式。

海洋生态系统在埃及已经证明是多产的资源为各种类型的海洋细菌,尤其是芽孢杆菌物种产生不同的刺激生物代谢物对传染性病原体分布广泛耐药Enterococci压力和癌症。乙酸乙酯提取的枯草芽孢杆菌对所有临床ESRAA3010显示强大anti-MDRE活动Enterococci隔离正在研究包括粪大肠,大肠都有效,大肠raffinosus,e·杜兰,大肠mundtii和e .鸟结核麦克风4 56,4到12个,4到8日4到8日8和4µg / mL,分别和MBC 8到64年,4至16日4到12个,4至16日分别20和8µg /毫升。芽孢杆菌细小ESRAA3010提取anti-proliferative展出活动对结肠癌、肺癌、肝脏和乳腺腺癌与IC₅₀等于39岁、50、75和19µg /毫升,分别。我们的数据支持的潜在应用枯草芽孢杆菌ESRAA3010提取在药物输送和工业小说,并承诺抗菌和/或抗癌药物对致命的传染性病原体和癌症。

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