英夫利昔单抗对实验性胰腺炎发展的影响

Lychkova Ae^1*，golubev yu yu²和puzikov am³

¹俄罗斯莫斯科卫生局莫斯科临床科学中心部主任

²新泽西州俄罗斯国家研究医科大学副教授皮罗戈夫，俄罗斯

³俄罗斯莫斯科卫生局莫斯科临床科学中心的合作者

*通讯地址：莫斯科临床科学中心部主管Lychkova AE，医学博士，莫斯科卫生局，莫斯科86号，莫斯科，莫斯科，111123，俄罗斯，电话：8-962-965-4923；电子邮件：lychkova@mail.ru

日期：提交：2017年7月28日;得到正式认可的：2017年8月24日；发布：2017年8月25日

如何引用本文：Lychkova Ae，Yu Gy，Puzikov AM。英夫利昔单抗对实验性胰腺炎发展的影响。Ann Clin Gastroenterol Hepatol。2017;1：007-011。doi：10.29328/journal.hcg.1001003

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关键字：鼠;胰管；运动功能；胰腺炎;英夫利昔单抗

急性胰腺炎是对由肿瘤坏死因子α（TNF-A）介导的胰腺损伤的炎症反应[1]。英夫利昔单抗（商品名Remicade等人）是一种嵌合单克隆抗体生物学药物，诱导了TNF-A产生细胞的裂解。针对TNFα的单克隆抗体，包括英夫利昔单抗，阿达木单抗，golimumab和certolizumab pegol，被广泛用于治疗炎症性疾病，例如类风湿关节炎和炎症性肠病。最近，TNFα的晶体结构与英夫利昔单抗和阿达木单抗的Fab片段相关，已经揭示了这些抗体药物的分子机制[2]。

急性胰腺炎是一种严重的疾病，死亡率很高。临床研究可以带来有关病因，发病机理和急性胰腺炎的一些数据。但是，由于道德原因，关于这种疾病早期事件和新治疗概念的研究不能对人类进行。已经开发出急性胰腺炎的动物模型来解决这个问题[3]。近年来，在实验模型中已经发表了许多有关急性胰腺炎治疗的文章[4]。已知在胰腺炎期间胃肠道的推进活性的障碍[5]。通过方法肌电图治疗与该活性的障碍有关的英夫利昔单抗治疗胰腺炎的治疗不足[6]。目的是通过应用英夫利昔单抗确定实验性胰腺炎中胃肠道的运动功能的可能性。

动物

该研究是在俄罗斯莫斯科莫斯科卫生部临床研究中心进行的。重210至230 g的女性Wistar大鼠是从俄罗斯莫斯科地区生物医学技术中心获得的。在实验之前，在恒温和12小时的光/深度循环下，将动物喂入标准的大鼠部分和水的可选部分，并在代谢笼中饲养。实验前12小时撤回食物。该实验得到了俄罗斯莫斯科临床研究中心的机构动物使用和护理委员会的批准。

急性胰腺炎的实验模型

麻醉是用nembutal吸入诱导的。剖腹手术是通过高中线切口进行的。插管胰管。然后，通过以1：1的比例逆行注入0.1 mL的picrylsulfonic酸，将胰腺炎逆行输注为1：1，将胰腺炎倒入胰腺导管中，对胰腺炎进行了建模。输注后，腹部分为两层。所有程序均使用无菌技术进行。

研究方案

稳定期后，将14只雌性大鼠分为三组。第1组和第2组接受了急性胰腺炎的诱导。第1组（胰腺炎加盐水，n = 5）接受了盐水注入（10 mL/kg，IP），而第2组（胰腺炎加富夫昔单抗，n = 5）接受英夫利昔单抗（Janssen Biotech，Inc。，美国）（10 mg/kg/kg注射（0.125 mL，IP）2-3分钟，直到将picrylsulfonic酸施用到胰管中。第3组（Sham Plus Saline，盐水，n = 4）仅进行腹腔切开术，仅操纵胰腺。

肌电图

（EMG）使用对照中的表面双极电极，胰腺炎诱导后和模拟胰腺炎的第15天，记录了胰管的（EMG）。

测试急性坏死性胰腺炎的形态严重程度

胰腺炎发育的第15天和胰腺炎发育的第15天对胰腺进行了形态学研究，在初次服用英夫利昔单抗的情况下。将组织样品固定在9％的福尔马林中，在浓度升高的酒精中脱水，封闭在石蜡中，制备组织学切片并用苏木精和曙红染色。

统计处理

使用数据包计划Statistica-6进行了获得的数据的统计处理。所有定量数据（遵守正态分布）均以平均值M±M表示。为了处理获得的数据，应用了标准学生（T），其差异（p）和标准χ2的可靠性不同。当n <0.05时，平均值之间的差异被认为是可靠的。

完整大鼠完整大鼠胰管的EMA的测试频率为每分钟10.3±0.8，振幅0.18±0.012 mV。

picrylsulfonic酸的给药导致胰管的EMA增加到每分钟13.7±1.6（33％，n <0.05），幅度为0.28±0.07 mV（55.5％，р<0.05）。除此之外，还观察到频率为2.0±0.1，幅度为0.21±0.011 mV。因此，在模拟胰腺炎的模拟过程中，观察到慢波和尖峰活性的频率和幅度增加，这通常证明了管道平滑肌细胞的兴奋性增加（图1）。

在15^Th胰腺炎的模拟日，胰管慢波EMA的频率为10.9±0.9每分钟（降低20.4％），幅度-0.32±0.02 mV（增加了14.3％）。在33％的情况下，确定了平均振幅的尖峰活性，一个慢波（-50％，<<0.05），幅度–0.15±0.003 mV（-28.5％，n，a），尖峰频率为1.0±0.03（-50％，<<0.05），幅度为1.0±0.03。<0.05）。这些指标证明了在胰腺炎的第15天保持管道平滑肌细胞的高兴奋性。

胰腺施用后15天进行的胰腺的形态学研究显示，小叶的水肿和叶间和叶内结缔组织的浮肿略有增加。细胞内结缔组织层分为几组细胞。不足道的动脉和一些膨胀的静脉，红细胞的边际站立位于囊肿间空间。大多数外分泌细胞都含有酶原颗粒。破坏性细胞的一些积累位于腺体的分离位点中。具有营养不良特征的变化的细胞位于腺体分离的部位：缺乏细胞质，分泌颗粒不存在，核保持正常的结构或在不同的水平上被压缩。破坏性变化的细胞含有少量的酶原颗粒。胰岛中内分泌细胞的密度有所降低：在细胞之间扩展空间，并检测到带有单个毛细血管的结缔组织。毛细血管扩张（图2）。

管道含有不同密度的均质蛋白质。管道上皮是立方体。上皮细胞的核很大，清晰染色，中等聚集的染色质，突出到管道的腔内。带有单个红细胞的静脉和毛细血管膨胀，靠近排泄管道。动脉通常直径。肌肉膜很薄，由一些平滑肌细胞层提出。

在英夫利昔单抗施用胰腺炎的15天，胰腺炎的慢速电气活性的慢波电波频率为胰腺炎的背景，为10.3±0.7每分钟（-5.5％，> 0.05），幅度-0.21±0.02 mv（-34.44.44.44.44.44.44.44.44.44.44.44.44±0.05％）％，n> 0.05）;在所有观察结果中揭示了加标活性，频率为2.3±0.2（129.9％，<> 0.05）和幅度0.18±0.02 mV（20％，р> 0.05）。也就是说，在英夫利昔单抗给药条件下，在胰腺炎期间，导管平滑肌细胞的收缩功能恢复到控制水平。

胰腺对胰腺进行的形态学研究显示，在英夫利昔单抗作用的背景下进行picrylsulfonic酸，发现单个叶片的水肿。不足道的动脉和微不足道的静脉，散布着红细胞的停滞，位于腔间空间中。外分泌细胞含有少量的酶原颗粒。胰岛中内分泌细胞的密度有所降低。小管道含有少量蛋白质均匀分泌（图3）。

胰腺炎的模拟伴随着导管的胰管运动活性的振幅频率特征。导管平滑肌细胞的功能状态的变化伴随着一部分外分泌细胞的破坏，胰腺小管中粘性分泌的积累，它们与导管的运动功能的变化一起可能导致蛋白水解的激活。腺体本身组织中的酶，其进一步破坏的可能性。

实验15天后的英夫利昔单抗的给药使胰管的运动功能归一化。胰管导管平滑肌细胞运动功能的归一化伴随着叶的水肿严重程度的降低和外分泌细胞的破坏，小管中蛋白质分泌的外观降低，这表明了骨细胞和外分泌细胞合成功能正常化的归一化。胰腺分泌的流出恢复。

因此，在初步服用英夫利昔单抗的条件下，胰腺炎在胰腺炎期间胰管的运动功能的激活不会导致胰腺结构及其外分泌细胞结构的形态变化非常严重。在胰腺的小管道中，实际上未发现粘性分泌物的积累，这阻碍了胰腺分泌向十二指肠的流出。英夫利昔单抗在胰腺炎发展中采取了保护作用。