使用相关的显微镜研究和治疗支原体感染ophtalmic粘膜

目的:我们学习了18个月的21个病人显示kerato-conjunctivitis和/或dermato-blefaritis,我们会发现一个常数存在支原体在SEM光学细胞学样本。21例患者分为如下:7过敏,7所谓过敏和7不过敏,这个部门之间它使临床方法考虑临床病史和症状。在第一次检查,16有单个或多个的21例患者中感染的主要致病因素被发现支原体;剩下的7,4人被怀疑过敏患者,2,过敏的主题与嗜酸性粒细胞和肥大细胞的存在。

材料和方法:所有的研究是基于citological光学显微镜和citological电子扫描显微镜(SEM)图像演示临床方法的SEM过敏的功效,不过敏,怀疑过敏的病人。

治疗治疗和结果:治疗过敏和假过敏的病人已经与当地somministration方铅矿的成分与ialuronic酸3毫升和30毫克盐酸四环素可的松水平低和antisthaminic疗法。这种治疗需要消除支原体感染和抵消的病原体粘膜毒性作用。

讨论:适当治疗后我们注意到对冗余的过敏患者更倾向在短时间内感染(最低20天),而所谓过敏的病人有更多的长期感染期(3至5个月),常出现在低水平的持续的支原体。后者继续显示体征和症状类似于过敏患者,但随着眼泪IgE的负面测试,没有嗜酸性粒细胞和肥大细胞,在光学和扫描电镜样本显示。

这项研究包括21个病人,分为3组,过敏,不过敏,和所谓的过敏,选择临床历史和表现在第一次访问;21例患者的治疗进行了一段时间内的18个月。编译后的仪式同意隐私的执行调查,遵循考试与topcon生物显微镜。生物显微镜视野允许一个初步诊断,观察2过敏性结膜炎过敏组,3 dermatoblefaro-conjunctivitis 1 kerato-conjunctivitis和化脓性calazosis根据历史;所谓的过敏,我们发现3睑缘炎、结膜炎,2 dermatoblefaro-conjiunctivitis其中1与点状角膜炎,睑缘炎和1结膜炎;在过去集团(第三个非过敏性患者)我们描述,根据病史和迹象,1 dermatoblefaro-conjiunctivitis (II型糖尿病abitus), 3溃疡的cogan-like 2结膜炎和1巩膜炎。病人有泪珠在睑板结膜的水平由于特殊抹刀,这种分泌物是转移到一轮13毫米幻灯片阅读在SEM和极化和彩色幻灯片Pappernheim展示全景的光学显微镜(Maygrunwald-Giemsa)阅读;此外,生物显微镜的拍摄,没有荧光素记录病人在治疗的现状。

总之是观察病人感染了支原体和allergic-like体质提出了一个不同的病理过程在18个月内过敏性和非过敏性的科目。在SEM citology删除眼泪因此变得无关紧要的区别inflammatory-infection焦点,强烈支持临床实践和创造发展的强有力的区别药物治疗(图1 - 6)。

支原体

在文献中报道,支原体[1,2]是已知的最小的细菌形式,它们缺乏细胞壁和柔膜细菌属于类。最著名的支原体,产生干扰是呼吸道和通常是肺炎支原体。肺炎发生1200万年只有10% - -15%的情况下,而且在大多数情况下(30% - -40%)包括气管支气管炎和非典型性肺炎,或15%的肺炎病例。有支原体结膜炎的狗、猫和牛是记录,所以它知道这种类型的细菌很容易攻击不仅通风,而且眼部和泌尿道粘膜,但直到现在没有描述micoplasma眼部感染人类的表面,因为它是如此难以发现与正常colture古典,如果不是做了一个特定的请求。但是有很多病人,属于重大病史眼部疾病的病因不明。确定支原体有必要接种琼脂媒体富含的蛋白质来源,蛋白胨、酵母和胆固醇提取血清的形式。酚红被添加到培养基作为酸碱指示剂,用醋酸铊和pennicillins抑制其它微生物的生长。样例因此接种在琼脂应该放在5%的二氧化碳和95%的空气。第二个土壤将通过一个两阶段,然后传递给琼脂。支原体琼脂殖民地的发展呈现典型的煎蛋的形状。 The diagnosis of Mycoplasma infection is mainly performed on clinical grounds. Bacteria can be grown from excreted samples or exudate swabs, but this procedure takes several weeks to produce results. Mycoplasma not invade the epithelium, but adheres to the host cells by means of specialized ends P1, protein adhesin, which adheres to neuraminic acid residues and is responsible for the virulence. Once adhered to the tissue they form hydrogen peroxide to dig the underlying mucosa. Some mycoplasmic antigens act as superantigens creating an aggravation of the pathology. There are a lot of methods to identify mycoplasma; starting to biomolecular methods (pCR number of options are available for conclusive detection of the presence of mycoplasmas in escretous fluid) to arrive at confocal vision, where they appear grouped in colonies with a typical fried egg appearance; but in our opinion the best practice is the Electron scanning microscopy, where individual colonial constituents can also be seen and often appear to interact parasitic with other bacterial forms. Under the SEM microscope, they are clearly visible as spherical elements with a diameter between 0.1 and 0.2 µm, often grouped in circular or dome-shaped aggregates or even in cluster formations. This tecnique can isolate and put in evidence mycoplasma infection without any particular clinical request and with a very short time of investigation considering timing of pCR and colture media grown.

细胞学的方法

刮的细胞学抽样技术的睑板结膜抹刀平滑。conjuctiva粘膜细胞和分泌物都放在幻灯片(超级霜+门泽尔-格拉泽,热科学、米兰、意大利)。根据展示全景的细胞被染色方法(3分钟在纯May-Grunwald染料(Carlo Erba、米兰、意大利),6分钟50% May-Grunwald染料;1分钟再蒸馏的水(Carlo Erba、米兰、意大利);30分钟,染色方案(Carlo Erba、米兰、意大利)稀释1:10 v / v)。幻灯片被覆盖着一个# 1玻璃盖的尺寸24 x 50 mm,光学显微镜下观察(尼康Eclipse 50我)在100 x油浸肿大。图片记录使用尼康DS1的相机和电脑支持数字化使用NIS-D元素。SEM方法,应用于实践的刮细胞学睑板结膜粘膜的分泌放在13毫米DIA轮滑动(琼脂科学)。圆的样本幻灯片gluteraldehyde固定在2%,然后在PBS洗15分钟3次pH值为7.4;然后在OSMIO 2 h为4%。 Then the samples are 2 times washed in PBS at pH 7.4 [Carlo Erba, Milan, Italy] each at 30 min, finally the sample thus treated is dehydrated in alcohol at increasing concentrations; 30% at 25 min, 50% at 25 min, 70% at 20 min and 96% at 20 min for 2 times. Once dehydrated the sample is placed in critical-point CO2 (critical point at 31 °C and 73 atm) (Leica EM CPD300). The preparation was viewed in scanning microscopy with JEOL microscope supplied to the Department of Earth Sciences (DiSTAR) of the University Federico II of Naples. The treatment of the samples allowed to visualize at various magnifications the bacterial species colonizing the ocular mucosa and the typical inflammatory cells; moreover the culture has placed attention on the pathogens involved in the phlogosis of the ocular mucosa of the patient under examination. The using of correlative microscopy put in evidence the correlation between flogosis cells (in evidence with classical citology most) and pathogens in specific Mycoplasma, (in evidence just with scanning electron microscopy); this technique facilitates the diagnosis and the therapeutic treatment.

患者进行治疗的药理治疗考虑临床历史和迹象显示的视觉表现与细胞学结果生物显微镜和协议进行SEM(扫描电镜)。我们注意到病人所谓过敏(表1,4)对治疗的反应不同于过敏患者(表2、5)和不过敏患者,事实上后者解决炎症感染的现象在4个月/ 1年(表3、6),而对于所谓putients过敏和过敏反应治疗遵循不同的节奏,如上所述。治疗过敏的主题:根据临床实践,它是用抗组胺药和低水平的可的松3,结合疗法与特定抗生素在SEM病原体分类。然后用ialuronic方铅矿的成分酸3毫升和盐酸四环素30毫克1下降管理每3个小时为30天,消除支原体为系统性somministration氟康唑,40天,PHMB 0.02%(分布式sifi)根除Acanthamoeba长达1周。病原体的根除治疗是观察到的总主题宣布在4个月内不过敏(图7 a、B),而汇款周期开始治疗的观察不同的病原体的出现有些宣布过敏体质的人,和一个感染周期封闭前20天治疗,而一个常数存在支原体(3、4)(图8 a e),即使在非常低的浓度和汇款周期,然而,随着时间的推移让病人更持久的治疗和最后的时刻总缓解症状甚至几个月(图9 a, B)。

基于当前文学和医学领域的出版物和ophtalmology最多,超级抗原功能由支原体(5、6)突出显示。超级抗原支原体函数解释受试者发现的不同的行为。事实上,所谓过敏的患者属于组没有出现撕裂IgE[7]所示的统计图显示一个常数,支原体的存在,这产生了一种慢性latent-type炎症管理模拟过敏型反应[7,8]。从我们的研究我们可以理解,支原体感染的关键作用,事实上它是一个辅助因子描述传染病类型学,但特别是在过敏和所谓过敏的情况下,它会创建一个刺激免疫系统的现象(9 - 12)。superantigene在支原体的作用(5、6)是事实确定,但其存在的眼粘膜迄今为止没有证明除了脊椎动物(2、9、10、13),占据了大部分的科学文献,是一个问题轴承在众多结膜炎(9、13、14)。因此,SEM,强调这种病原体的作用和需要确定它的角色在眼部疾病。数据的解释我们的研究得出的结论,它不仅增加炎症,免疫系统的创建一个多动的现象(见过敏),但它会创建一个持续的炎症,以创建一个类似的过敏反应(见所谓过敏),然而,嗜酸性粒细胞炎症过程不再支持[7]在短时间内(1年或多或少),但通过淋巴细胞细胞,从而创建一个False-allergic abitus [15]。因此现在的问题担忧的治疗患者支原体及其根除;有人见过支原体的不同行为选择的三个组,非过敏性组,当有害开始的高度,这就变成了一个投机取巧的病原体,它是在短时间内根除治疗的实施;过敏患者反而变得放大器和起点再感染phenomena21即使在最小的浓度; these patients show short periods of shortness, followed by brief periods of recurrence, until the end of the allergic inflammatory cycle. In false allergic patients, there is a constant presence of the Mycoplasma, a persistent activation of the immune system is created [3,15], the mycoplasma becomes irritative spine and a nutritional focus for relapses until the natural end of their infective cycle. Therapeutic treatments must therefore be supported in these latter subjects with mild cortisone [3,16,17] in small quantities and therapies that go to eradicate the “primum movens” of the pathology, namely Mycoplasma [18-26].

伦理批准

所有程序中执行研究涉及人类受试者按照道德标准机构国家研究委员会1964年赫尔辛基宣言及其后来的修正案或类似的道德标准。

1. Alverson BK Rogozinski勒,他满EA,儿童肺炎支原体的诊断和治疗。密涅瓦Pediatr。2017;69:156 - 160。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28178776
2. 李P,张Y,李X,周W,李X, et al .支原体hyopneumoniae Mhp597细胞毒性、炎症和免疫抑制核酸酶有关。兽医Microbiol。2019;235:53 - 62。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31282379
3. 崔YJ,全JH JW。关键的初始标记组合预测儿童难治性肺炎支原体肺炎:病例对照研究。呼吸系统研究。2019;20:1 - 9。
4. 谢长廷CC,唐RB,蔡CH,陈w .血清白细胞介素- 6和肿瘤坏死因子-α浓度与儿童支原体肺炎。J Microbiol Immunol感染。2001;34:109 - 112。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11456355
5. 崔Hodtsev, Y, Spanopoulou E, Posnett DN。Posnett支原体超级抗原是一种CDR3-dependent T细胞抗原受体的配体。J Exp。1998;187:319 - 327。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9449712
6. 德普T,弗雷泽JD。细菌超级抗原。Exp Immunol。2003;133:299 - 306。
7. 福特R, Cennamo G,德尔Prete年代,纳波利塔诺N, Farese E, et al . .Allergic结膜炎和潜伏感染。角膜。2009;28日:839 - 842。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19654537
8. 柯南道尔广告,慕克吉M, LeSuer我们Bittner结核病,帕夏SM, et al . Eosinophil-derived IL-13促进肺气肿。欧元和j . 2019;53岁。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30728205
9. Kornspan JD,提苏尔塔西斯M, Rottem年代,布兰诺t .支原体hyorhinis诱发小鼠淋巴细胞的促炎反应。J基本Microbiol。2015;55岁:679 - 684。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25042355
10. Schaunaman N,桑切斯,Dimasuay G·帕夫卡N,阿拉姆R, et al。白介素1受体1 (IL1RL1)促进气道细菌和病毒感染和炎症。感染和免疫。2019;87年。
11. Kim Jeong YC,杨女士,JH,李HB,哦JW。肺炎支原体感染影响血清血管内皮生长因子和interleukin-5过敏性的孩子。过敏哮喘Immunol杂志2012;4:92 - 97。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22379604
12. Seo Y, Yu BK,哦YJ,李Y, Yoo Y, et al。增加血管内皮生长因子在儿童急性肺炎支原体肺炎和喘息。韩国J Pediatr。2008;51:487 - 491。
13. Hawley DM,莫耶SC,卡塞雷斯J, Youngbar C,阿德尔曼JS。描述的单边结膜与支原体疾病接种房子雀。禽流感分册,2018;47:526 - 530。
14. Fernandez-Aguilar X,大头鱼O,弗雷J, Velarde R,塞拉诺E, et al。长期动态的支原体结膜wildlife-livestock接口在比利牛斯山脉。《公共科学图书馆•综合》。2017;12:e0186069。
15. 沙公关,威廉姆斯,Pihlblad Nischal KK。眼科Mycoplasma-Induced皮疹和粘膜炎的表现。角膜。2019;38:1305 - 1308。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31246679
16. 肯塔基州李,李海关,香港JH,李MH,李JS, et al .强的松治疗的作用在儿童严重肺炎支原体肺炎。Pediatr Pulmonol。2006;41:263 - 268。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16437541
17. Radisic M,撕裂,古铁雷斯P, Defranchi哈,Pardo P .严重肺炎支原体引起的急性肺损伤:脉冲在类固醇治疗潜在的作用。感染说。2000;31日:1507 - 1511。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11096025
18. 小牛顿,Ah-See千瓦。回顾鼻息肉病。其他风险等内容。2008;4:507 - 512。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18728843
19. 威茨KB,刘小L, Y, Balish MF,阿特金森TP。从呼吸道肺炎支原体。中国Microbiol启2017;30:747 - 809。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28539503
20. 考恩可。微生物学:一个系统的方法。麦格劳-希尔。2018年。
21. 方KN,王J,倪JW。肺炎支原体DNA复制水平与疾病严重程度之间的相关性在儿童患有严重肺炎支原体肺炎。中国公司男装Er客杂志。2019;21日:876 - 880。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31506145
22. 小Leal齐默菲利普-马萨,莫拉H,巴尔,费雷拉HB。细胞内的变化猪气管细胞系感染支原体hyopneumoniae致病性。活细胞Pathog。2019;137:103717。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31494300
23. 彼得Resende TP, M, Vannucci足总。猪支原体hyorhinis结膜炎暴发。J兽医成岩作用投资。2019;31日:766 - 769。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31342882
24. 卡鲁索AA,中提琴V,德尔Prete年代,狮子座,Marasco D, et al .识别和表征鼻息肉病和重复感染支原体通过扫描电子显微镜与光学显微镜和鼻腔细胞学:一个案例报告。诊断(巴塞尔)。2019;9。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31689994
25. 德尔Prete, Loffredo C, Carderopoli Caparello O,佛得角R, et al .当地特定的免疫治疗过敏性结膜炎。Acta角膜(Copenh)。1994;72:631 - 634。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7887165
26. 哈达RA,被刺毫米。研究患病率和协会的眼衣原体结膜炎的女性生殖器感染沙眼衣原体,支原体支原体和白色念珠菌参加门诊Int J角膜切削。2016;9:1176 - 1186。PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27588273