哮喘、过敏和免疫学档案

研究文章

特应性皮炎的干扰素和细胞因子状态特征

Ospelnikova TP*、Gevorkyan OV、Mironova TV、Andreeva SA、Kolodyazhnaya LV和Ershov FI

联邦国家预算机构，俄罗斯联邦卫生部"以N.F.Gamaleya名誉院士命名的联邦流行病学和微生物研究中心"，地址:俄罗斯联邦莫斯科，Gamaleya街18号，123098

*通讯地址：Tatiana Ospelnikova，联邦国家预算机构，“以N.F.Gamaleya荣誉院士命名的联邦流行病学和微生物研究中心”，俄罗斯联邦卫生部，俄罗斯联邦，电子邮件:ospelnikovat@mail.ru

日期：提交：2017年4月20日；经核准的：2017年5月26日；发表:2017年5月29日

如何引用这篇文章：Ospelnikova TP，Gevorkyan OV，Mironova TV，Andreeva SA，Kolodyazhnaya LV等。特应性皮炎中干扰素和细胞因子状态的特征。哮喘过敏免疫。2017; 1: 009-014. 内政部：10.29328 / journal.haard.1001002

版权:©2017 Ospelnikova TP等。这是一篇在知识共享署名金博宝app体育许可下发布的开放存取的文章，它允许在任何媒体上无限制地使用、传播和复制，只要原始作品被适当地引用。

关键词：过敏性dermatits;细胞因子;疱疹病毒;干扰素诱导物Cycloferon;ELISA

摘要

特应性皮炎患者，尤其是合并持续疱疹病毒感染的患者，干扰素产生不足和细胞因子失衡已被确定。干扰素诱导剂环磷酰胺治疗慢性特应性皮炎的便利性已被证明。

介绍

特应性皮炎（AD）是最常见的慢性复发炎性皮肤和过敏性疾病之一[1-3]。AD指的是社会显着的疾病。这种疾病持续了多年的临床症状，它通常经常转化为支气管哮喘，具有严重的特征综合征，或者患有患有皮肤的全身性疾病，而且还具有消化，呼吸道，泌尿系统等内器官[4,5].寻求有效的预防和治疗药物旨在提高广告患者的生活质量是过敏症，免疫学家，皮肤病学家的重要问题之一[6]。

众所周知，免疫不平衡，以及遗传易感性，在广告发病机制中起着几乎发挥着主要作用。已经确定，广告发育中的主要免疫病理机制是Th1 / Th2-淋巴细胞的比例的变化，这些机制有利于后者的特征IgE反应性和对各种exoallergers的特异性IgE抗体的高生产。同时，存在关于细胞介导的细胞介导，免疫病理发生中的过敏反应的数据的数据，特别是其慢性严重形式[7]。

AD的特征是先天免疫系统和皮肤屏障特性的损伤，这解释了AD患者对各种感染性疾病的敏感性增加。AD患者皮肤损伤区域以Th2表型的活化CD4+细胞为主，促进B淋巴细胞产生IgE。绝大多数患者在吸入(家庭尘螨和动物皮屑)或食物过敏原[8]的皮肤试验中显示出阳性反应。还透露,在CD3-positive患者的外周血细胞广告,ETEA基因的表达是大幅增加,产品的(445个氨基酸的蛋白质)在调节过程中发挥作用的敏感性T细胞和嗜酸性粒细胞proapoptotic刺激[9]。

随着特性，自身免疫反应确定疾病的慢性复发过程可能在广告形成机制中发挥作用。也许在AD的发病机制中，特别是对位于不同器官的细胞的免疫应答，例如皮肤，肺，肌肉和大脑的免疫应答。此外，在某些患者中加剧AD的AD与IgE自身反应的增加有关[10]。

干扰素（IFN）的产生不足作为先天免疫的最重要因素，在AD的发病机制中起着重要作用，加重病程，延长恶化持续时间，减少缓解。

本研究的目的是通过测定AD患者的IFN和细胞因子状态以及国产低分子IFN诱导剂环磷酰胺（Cycloferon）对其纠正的效果，来研究免疫反应性疾病的特征。

材料和方法

学习材料。14名实际健康的人(对照组)和15名AD患者(急性期)的血液(肝素化和血清)。

耐心

一组AD患者是根据莫斯科市14号临床医院命名的。V.G. Korolenko。观察AD患者15例，年龄18 ~ 25岁(女性9例，男性6例);所有患者均处于加重期。AD的诊断是基于临床和实验室资料。该研究方案由当地伦理委员会莫斯科城市临床医院批准。所有患者均签署知情同意书并献血。患者从幼儿开始就有临床表现。病情的严重程度是在病情加重期间，即入院时确定的。8例AD患者病程为中重度(每年发作3-4次，缓解期2-3个月)，7例患者病程为重度(每年发作5次，短期缓解1-2个月)。 In all patients, the process was widespread (lesion area 46-49%), represented by erythematous-squamous foci with excoriation and white dermographism. In 85% of patients in case history there were clinical manifestations of herpetic infection (Herpes simplex), at the time of the examination the herpetic eruptions were not manifested. Eosinophilia was detected in 95% of patients in a clinical blood test. Worms’s invasions are excluded in all examined patients. The level of IgE was increased in 70% of the subjects. As a control group, 14 practically healthy men and women were examined, aged from 25 to 55 years, who had no history of allergic manifestations and there was no hereditary complication.

所有群体都以IFN和细胞因子状态评估，在入院和治疗后的AD患者中。临床观察在一年内进行。患者接受基础疗法（抗组胺药，排毒，低敏化药物），在治疗急性加剧后，基环中加入2.0mL肌肉内的方案：1,2,4,6,8,11,14,17,20,23天注射。

环磷酰胺

辛酸葡胺是一种国产低分子干扰素诱导剂（“Polisan”，俄罗斯）。此前，研究表明该药物是干扰素和其他细胞因子的诱导剂，可激活细胞和体液免疫应答（Th1/Th2）。此外，它增强中性粒细胞的功能活性，激活吞噬功能，增加吞噬细胞产生的活性氧。环磷酰胺的抗炎作用是由于对促炎细胞因子（IL-1b、IL-8和TNF-a）合成的剂量依赖性抑制作用，以及抗炎细胞因子IL-10和/或TGF-b的单核生成。

方法

IFN状态包括循环IFN;新城疫病毒感染白细胞产生干扰素α的水平用10µg/ml FGA(«Difco»)诱导淋巴细胞产生IFNγ的水平，在全肝素化血中测定体外自发产生IFN的水平。单位/ml的IFN被计算为反向稀释，保护50%的细胞单层免受病毒诱导的细胞病变效应[11]。

ELISA

对于血细胞的培养和丝分裂原刺激，使用了一组试剂试剂“细胞素 - 刺激 - 最佳”，IFN-α，IFN-γ，IL-1B，IL-6，IL-8，IL的浓度使用ELISA试剂盒«最佳»（俄罗斯）和IL-13（“BENDER MEDSYSTEMS”，奥地利）测定-17，IL-2，IL-4，IL-10，TNF-α。

使用BIOSTAT程序对数据进行统计处理(计算M±σ，配对学生测试平均值差异的可靠性)。

后果

在临床血液分析中发现，大多数AD加重的患者表现为嗜酸性粒细胞增多（95%）和血清中IgE浓度升高（70%）。所有患者在病情恶化阶段都有一个复发过程（每年3-5次恶化）。用生物学方法对干扰素系统进行的研究表明，受检组和对照组之间的比率存在差异。从图1中可以看出，在所有接受检查的AD患者中，IFN系统缺乏α-干扰素的产生，尤其是血白细胞产生γ-干扰素。平均IFN状态为（U/ml）：产生α-IFN血白细胞的能力为174.7±17.94；IFN-γ-12.53±0.77；血清IFN-7.87±2.32；自发干扰素-0.2±0.11。血清干扰素滴度升高6例（40%）；3例患者（20%）出现自发干扰素。

图1：通过AD患者的血白细胞产生IFN-α和IFN-γ（U / mL）（P <0.05）（LOG2 SCAL）。

通过分析获得的数据来确定血液中细胞因子的水平，我们可以注意到AD患者与健康供体(对照组)相比的一些特征。促炎细胞因子含量增加，尤其是IL-8 (p<0.05)， IL-6含量较低(p>0.05)，同时IL-2含量显著降低(p<0.05)(图2)。15例患者中，5例血清IL-8值超过100 pg/ml (97 ~ 575 pg/ml)。治疗后，这些指标均已正常化。血清TNF-α 3例(20%)，IL-1β - 5例(33.3%)。

图2：AD患者血清中细胞因子的含量(pg/ml)。

众所周知，Th2细胞负责在过敏性疾病中造成体液类型的免疫应答和IL-4，IL-10，IL-13的大实验。然而，在AD患者的血清中未检测到IL-4，IL-10在1名患者（6.7％），IL-13中检测到3例（20％）。

需要注意的是，虽然在AD患者血清中观察到两种IFN的诱导和自发产生，但IFN-α和IFN-γ均未检测到，这两种IFN在AD患者中分别是4.5倍和1.5倍。自发产生的干扰素和诱导产生的干扰素之间有统计学差异(p<0.05)。

图3:AD患者血液白细胞诱导和自发产生IFN-α和IFN-γ（pg/ml）（log2量表）。

从图4可以看出，环铁素治疗后，外周血白细胞产生干扰素呈显著(p<0.05)阳性动态，有正常化趋势，血清IFN水平正常化，体外反应中自发IFN消失。另外，治疗后血清中促炎细胞因子如IL-8、IL-6水平，IL-2、IFN-a同时升高。

图4：治疗前后患者血液白细胞IFN-α和IFN-γ产量(U/ml) (log2标度)

免疫系统紊乱与血液白细胞产生α和γIFN缺乏能力的结合，揭示了血白细胞对IFN诱导因子CyfEron的反应性，认为它适合于在基础治疗后立即应用于AD恶化患者的治疗。

综合治疗后，出现了积极的临床动力学表现：减少红斑、降低瘙痒强度、阻止新成分出现、保持苔藓化、减少恶化次数和延长缓解期。

讨论

从所获得的数据可以看出，AD患者出现明显的IFN缺陷，特别是血液白细胞γ-IFN的产生。有一个完全自然的假设:先天免疫缺陷是AD的原因之一吗?众所周知，病毒长期存在会导致继发性免疫缺陷，而继发性免疫缺陷又会促进病毒自身的激活[12,13]。无论如何，在疾病的发病机制中，病人身体的免疫能力是非常重要的。在ifn的背景下，免疫缺陷常可发生AD的加重。

在这方面，在治疗中加入干扰素诱导剂似乎是合理的。其免疫调节特性是通过激活IFN-γ介导的。其产量的增加有助于免疫系统T细胞连接的恢复：使CD3+、CD4+、CD8+亚群水平以及CD16+、CD72+的数量正常化。早先的研究表明，环磷酰胺对慢性和复发性病毒和细菌感染患者以及继发性免疫缺陷状态（疱疹病毒和巨细胞病毒感染）患者非常有效[13]。环磷酰胺治疗也与复发性AD患者相关。环磷酰胺治疗减少了AD患者的恶化次数，延长了缓解期。

血液白细胞在刺激的影响下产生细胞因子的能力是明显的，AD患者白细胞合成IFN-γ的能力明显高于IL-4的合成，即在长期炎症过程中细胞因子的产生有一个经典的图像。在我们的病例中，这是一种慢性复发性AD，很难治疗。绝大多数（85%）接受检查的AD患者患有持续性疱疹病毒感染，众所周知，这会导致患者身体处于IFN免疫缺陷状态。据了解，这些病毒影响全世界1/3以上的人口，并导致广泛的人类疾病，从轻度疱疹病毒感染到特应性湿疹患者或严重免疫缺陷患者的疱疹样湿疹等播散形式。这些病毒位于细胞内，表现出临床上潜在的持续性疾病。此外，疱疹病毒科病毒能够影响Treg调节细胞的正常功能，加重潜在疾病的病程。

IL6、IL8和IFN-γ是特应性皮炎亚急性和慢性炎症的介质。复合治疗后促炎细胞因子水平的降低，尤其是IL8水平的降低，以及IL2水平的升高，表明炎症过程的减少。

血清中IFN-a的缺失可导致反复感染[14]。IFN-γ是由活化的病毒抗原Th1淋巴细胞分泌的，可抑制病毒的繁殖，扰乱病毒在细胞内的复制过程。然而，如果IFN系统存在缺陷(例如疱疹感染)，这种机制就不能很好地发挥作用或根本不起作用。由各种刺激、有丝分裂原诱导的细胞因子的合成反映了细胞对抗原刺激(特别是药物作用)作出反应的潜力和储备能力。体外细胞因子诱导产生的减少可以作为免疫缺陷状态的标志之一。

随着各种病毒制剂和环铁素的作用，整个信号级联被诱导，这涉及到生物体的“细胞因子网络”。众所周知，免疫系统的功能是建立在淋巴细胞(Th1和Th2)的平衡和适当的调节细胞因子[15]的等量产生的基础上的。形成成熟免疫反应的一个重要方向是调节干扰素的合成。细胞和NC产生IFN-γ Th1是通过所谓的IFN-γ诱导细胞因子，如IL-12、IL-2和TNF-a的刺激来实现的。此外，IL-18作为IFN-γ合成的潜在诱导剂，作为IL-12的增效剂，这两种细胞因子都通过刺激IFN-γ的产生，导致单核细胞/巨噬细胞系统的快速激活，而IFN-γ是由Cycloferon激活的。

因此，关于广告中细胞因子不平衡的新知识使得可以为这种不安的过敏性疾病的严重程度添加额外的标准（通过生物方法通过血白细胞产生IFN-A和特别是IFN-γ的能力降低在血清中增加IL-8和IL-6水平，患者患者尤其显着，IL-2水平降低），用于进一步暴露于治疗剂。

参考资料

  1. 与过敏相关的炎症性疾病：免疫发病机制概述和治疗意义。免疫过敏临床北Am。2017; 37: 233-246. 裁判。：https://goo.gl/sJp55z
  2. Eichenfield LF，Tom Wl，Berger TG，Krol A，Paller As等。护理指南治疗特应性皮炎：第2.局部疗法的管理和治疗特应性皮炎。阿卡德皮肤病杂志。2014; 71: 116-132. 裁判。：https://goo.gl/vkccdo.
  3. ong py，leung dy。特应性皮炎。临床过敏免疫素。2002;16：355-379。Ref。https://goo.gl/CSE6rP
  4. 等。对屋尘螨的早期敏感是日本特应性皮炎婴儿继发支气管哮喘的主要危险因素:4年随访研究的结果过敏性哮喘免疫。2002;89: 265 - 270。Ref。https://goo.gl/dt9msx.
  5. Krakowski Ac，Eichenfield LF，多士马。儿科人群特应性皮炎的管理。儿科。2008;122：812-824。Ref。https://goo.gl/UvI7RF
  6. Hanifin JM，Cooper KD，Ho VC，Sewon K，Bernice RK等。特应性皮炎护理指南。阿卡德皮肤病杂志。2004; 50: 391-404. 裁判。：https://goo.gl/eLCGe4
  7. Maintz L，Novak N.特应性皮炎中先天免疫系统的改变。先天免疫。2011; 3: 131-141. 裁判。：https://goo.gl/fjipwn.
  8. Zeiger RS，Heller S，Mellon MH，Forsythe AB，O'Connor RD等。母婴食物过敏原联合avidance对婴儿早期过敏性疾病发展的影响：一项随机研究。过敏临床免疫杂志。1989; 84: 72-89. 裁判。：https://goo.gl/PE8xyl
  9. 田中平，王志强，王志强，等。特应性皮炎患者血细胞ETEA高表达基因的克隆与鉴定生物化学与生物物理学报。2002;297: 1282 - 1290。Ref。https://goo.gl/4WYYE5
  10. Valenta R，Kraft D.从过敏原结构到新形式的过敏原特异性免疫治疗。当前的Opin免疫。2002; 14: 718-727. 裁判。：https://goo.gl/P8qy4K
  11. Ospelnikova TP、Konisheva AV、Mazurina SA、Lyzogub NV、Osipova VV。支气管哮喘患者干扰素系统和主要细胞因子的评价。微生物学、流行病学、免疫学。2012; 1: 35-41. 裁判。：https://goo.gl/DnkLld
  12. Ong PY，Leung DY.特应性皮炎中的细菌和病毒感染：一项综合综述。临床变态反应免疫。2016; 51: 329-337. 裁判。：https://goo.gl/ycc5cz.
  13. Ershov FI，Ospelnikova TP现代抗疱疹药物库。感染和抗菌治疗。2001; 4: 100-104.
  14. Simbirtsev。细胞因子:分类和生物学功能。细胞因子和炎症。2004;2: 16-23。Ref。https://goo.gl/s08PNm
  15. o'sheajj，averilм，丽脂р.细胞因子和自身免疫。Naturе评论免疫学。2002;2：37-45。Ref。https://goo.gl/Qncl40
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